Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Подготовка белка к гидролизу, в т.ч. этап выделения и очистки

являются  обязательными  при  проведении  испытания  нерасфасованных  или
дозированных  форм  лекарственных  средств,  содержащих  белки,  в  тех
случаях,  когда  они  содержат  мешающие  испытанию  вспомогательные
вещества или белковые носители.

Количественное извлечение белка из дозированной формы должно

быть валидировано.

В зависимости от размера, конфигурации белка, а также состава

лекарственного средства и готовой лекарственной формы, используются
различные подходы в подготовке белка к гидролизу.

В некоторых случаях может быть необходимо концентрирование

образца  либо  отделение  белка  от  используемых  в  готовой  лекарственной
форме  сопутствующих  веществ  и  стабилизаторов,  которые  могут  искажать
результаты картирования.

Для обеспечения полного доступа фермента к местам разрыва связей во

многих случаях необходимо сократить число дисульфидных связей путем их
восстановления  и  алкилирования,  а  так  же  использовать  частичную
денатурацию  белка  добавлением  соответствующих  агентов.  В  качестве
восстанавливающих  агентов  возможно  использование,  например,
дитиотрейтола  или  меркаптоэтанола,  для  алкилирования  йодацетамида,  4-
винилпиридина,  йодуксусной  кислоты,  для  денатурирования  мочевины,  и
гуанидина.

Физические методы выделения и очистки белка с использованием

колоночной  хроматографии,  диализа,  ультрафильтрации,  лиофилизации
могут  использоваться  в  ходе  подготовки  белка  к  гидролизу  наряду  с
восстановлением, алкилированием и денатурацией или как самостоятельные
процедуры.

Очистка белка от низкомолекулярных компонентов, входящих в состав

лекарственного средства или лекарственного препарата может проводиться
различными методами. Наиболее часто используются следующие способы,