Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

плазмы, 100 мкл разведения стандартного или исследуемого образца или 100
мкл 0,9% раствора  натрия хлорида (холостой опыт), добавляют по 100 мкл
АЧТВ-реагента и инкубируют смесь в течение 120 – 240 с при температуре
(37±0,1)°С. Затем в пробирку вносят 100 мкл предварительно прогретого до
температуры  37°С  0,025М  раствора  кальция  хлорида  и  фиксируют  время
свертывания образца. В зависимости от техники постановки анализа объемы
реагентов  могут  быть  изменены  с  соблюдением  пропорции.  Время
свертывания нормальной плазмы (холостой опыт) должно составлять 25 – 40
с.  Для  каждого  разведения  стандартного  и  исследуемого  образцов  время
свертывания определяют трижды.

2. Хромогенный метод

Метод основан на расщеплении хромогенного субстрата,

специфического  для  активированного  фактора  Х  (FXa).  При  внесении  в
образец,  содержащий  гепарин,  избыточных  количеств  ATIII  и  FXa
происходит ингибирование количества FXа, пропорционального количеству
гепарина.  Оставшийся  FXa  отщепляет  от  специфического  хромогенного
субстрата

-нитроанилин, абсорбцию которого определяют при 405 нм.

Таким образом, величина абсорбции обратно пропорциональна количеству
гепарина.

Данным

методом

определяют

содержание

как

нефракционированного, так и низкомолекулярного гепарина в анти-Xa
единицах.

Количество гепарина хромогенным методом определяют с помощью

коммерческих  тестовых  систем.  Для  построения  калибровочного  графика
используют  стандартный  образец  гепарина  или  плазму-калибратор,
аттестованную  по  международному  стандарту.  Стандартный  образец  или
плазму-калибратор разводят в дистиллированной воде согласно инструкции.
Готовят 4 разведения стандартного образца с концентрацией гепарина менее
1  анти-Xa  ед/мл, используя  буфер  для разведения pH  8,4.  Анализ  проводят
при температуре 37°С в соответствии с инструкцией к набору. Для каждого
разведения  трижды  определяют  абсорбцию  при  405  нм,  после  чего  в