Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

линейных координатах строят калибровочный график зависимости величины
поглощения от концентрации гепарина. Зависимость линейна в диапазоне
концентраций гепарина 0 – 1,0 анти-Xa ед/мл.

Для исследуемого образца готовят 2 разведения с концентрацией

гепарина менее 1 анти-Xa ед/мл. Анализ проводят согласно инструкции к
набору при температуре 37°С. Для каждого разведения величину абсорбции
определяют трижды.

Определение проводят в ручном режиме с использованием пластиковых

пробирок, микропланшет или в автоматическом режиме с использованием
коагулометра.

Для проведения испытаний в ручном режиме в лунки микропланшета

вносят  по  20  мкл  стандартной  плазмы  человека  и  20  мкл  раствора
антитромбина III. Далее в эти лунки вносят соответственно по 20 , 60 , 100  и
140 мкл испытуемого  или стандартного препарата и доводят объем раствора в
каждой  лунке  до  200  мкл  буфером  (активность  гепарина  в  конечной
реакционной смеси 0,02 - 0,08 ME/мл).

По 40 мкл из каждой лунки планшета переносят во вторую серию лунок,

в которые добавляют по 20 мкл раствора бычьего фактора Ха и инкубируют
при температуре (37±0,5)°C в течение 30 с, после чего в лунки добавляют по
40 мкл раствора хромогенного субстрата фактора Ха и вновь инкубируют при
температуре (37 ± 0,5)°C в течение 3 – 15 мин, измеряя скорость расщепления
субстрата  путем  постоянного  измерения  оптической  плотности  при  длине
волны  405  нм  (кинетический  режим)  или  после  остановки  реакции
добавлением  20%  (о/о)  раствора  уксусной  кислоты  ледяной  (конечная  точка
определения).

Содержание гепарина в испытуемом разведении определяют по

калибровочному графику с учетом разведения.

При проведении исследований в автоматическом режиме с использованием

коагулометра получают значения зависимости изменения оптической плотности
от концентрации гепарина.