Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Идентификацию белковых фракций проводят путём сравнения

электрофореграммы  испытуемых  образцов  с  электрофореграммой
контрольной  сыворотки  для  контроля  качества  электрофоретического
разделения белковых фракций. Сыворотка должна разделиться не менее, чем
на 5 фракций в следующей последовательности от линии старта: альбумин,
α1-  и  α2-глобулины,  β-глобулин  и  γ-глобулин.  После  проведения
электрофореза

проводят

количественное

определение

фракций

иммуноглобулина путём извлечения краски из плёнки элюирующим
раствором с последующим колориметрированием или путём денситометрии
электрофореграмм.

Количественное определение фракций иммуноглобулина

Колориметрическое определение

. Извлечение краски каждой фракции

проводят  в  3  мл  элюирующего  раствора  с  2-х  параллельных
электрофореграмм.  Элюцию  проводят  в  течение  40  мин  при  многократном
встряхивании.  Оптическую  плотность  полученного  элюата  измеряют  на
спектрофотометре при длине волны 620 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм
по отношению к элюату неокрашенного участка электрофореграммы. Сумму
оптических  плотностей  всех  белковых  фракций  принимают  за  100%  и
рассчитывают  процентное  содержание  каждой  фракции  препарата
иммуноглобулина.

Денситометрическое определение.

Электрофореграммы исследуемых

образцов  высушивают  между  листами  фильтровальной  бумаги  в
полиэтиленовом  пакете  (такие  условия  высушивания  исключают
деформацию  плёнки).  Высушенные  плёнки  просветляют  вазелиновым
маслом, пропитывая их таким образом, чтобы в плёнке не остались пузырьки
воздуха.  Для  этого  плёнку  следует  держать  горизонтально  и  нижней
поверхностью  осторожно  касаться  масла.  Избыток  вазелинового  масла
удаляют, промокая плёнку между листами фильтровальной бумаги.

Фракции иммуноглобулина записываются денситометром в виде

пиков. Величина площади каждого пика пропорциональна количеству