Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

краски, соединившейся с белком. С помощью автоматического интегратора
площадь каждого пика вычисляют по формуле площади прямоугольника (h

∙

d,  где  h  –  максимальная  высота  пика,  d  –  ширина  пика).  Сумма  площадей
всех пиков фракций иммуноглобулина принимается за 100% и вычисляется
процентное  содержание  каждой  фракции  в  испытуемом  препарате
иммуноглобулина.

Примечания

Подготовка плёнки из ацетата целлюлозы. Плёнку смачивают в

барбиталовом буферном растворе и гладкой стороной помещают в кювету на

поверхность буферного раствора на 2 мин, а затем пинцетом погружают на

дно кюветы и выдерживают 5 мин. После этого плёнку вынимают пинцетом,

избыток влаги удаляют между листами фильтровальной бумаги и заправляют

в рамку, избегая неравномерного натяжения и провисания.

Подготовка испытуемых образцов. Испытуемые образцы

предварительно обрабатывают 0,05% раствором красителя – бромфенолового

синего, используемого для отслеживания продвижения и распределения

белковых фракций препарата иммуноглобулина в процессе электрофореза. В

пробирку типа Эппендорф помещают 100 мкл испытуемого образца и 10 мкл

0,05% раствора бромфенолового синего и перемешивают. Окрашенные

испытуемые образцы в объеме 2-4 мкл помещают в каждую лунку лотка.

Приготовление барбиталового буферного раствора (рН 8,4)*. В

мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г натрия барбитала,

растворяют в 600-700 мл воды очищенной, прибавляют 11 мл 1М раствора

хлористоводородной кислоты, доводят объём раствора водой до метки и

перемешивают.

*Вместо барбиталового буферного раствора можно использовать

любой другой коммерческий буферный раствор с известным значением рН.

4. Приготовление 1М раствора хлористоводородной кислоты. В

мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 85 мл хлористоводородной

кислоты концентрированной, доводят объём раствора до метки и

перемешивают.

5. Приготовление красителя. К 0,5 г амидочёрного 10 Б прибавляют 10

мл уксусной кислоты ледяной, 3 г трихлоруксусной кислоты и 90 мл

этилового спирта и перемешивают. Для полного растворения краситель

оставляют на 24 ч. Перед использованием раствор красителя перемешивают

и фильтруют через бумажный фильтр.

6. Приготовление раствора для отмывки электрофореграмм

В мерный

цилиндр вместимостью 1000 мл помещают 40 мл уксусной кислоты ледяной,

прибавляют 700 мл воды очищенной и перемешивают. Затем объём раствора

доводят водой очищенной до метки и вновь перемешивают.