Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

В характеристике экспрессирующей конструкции указывают:

–

физическую (рестрикционную) карту экспрессирующей конструкции
(вектора);

–

число копий гена, наличие вставок или делеций, число мест интеграции
методом картирования с помощью рестрикционных эндонуклеаз или
других подходящих методик;

–

процент клеток, удерживающих экспрессирующую конструкцию;

–

нуклеотидную последовательность, кодирующую рекомбинантный белок.

учетом

предела

обнаружения

используемого

метода

последовательность  нуклеиновой  кислоты  должна  быть  идентична
последовательности,  установленной  для  экспрессирующей  конструкции,  и
соответствовать  планируемой  аминокислотной  последовательности  белка.
Нуклеотидная последовательность гена должна быть подтверждена не только
на  стадии  посевного  материала,  но  и  на  конечной  стадии  роста  клеточной
популяции (при использовании для ферментации в производстве новой серии
РБК  и  ГБК).  При  отсутствии  возможности  такого  анализа  (например,  при
непрерывном культивировании клеточных линий с мультикопийным геном)
следует  использовать  анализ  матричной  РНК  (мРНК)  или  анализ  общей
клеточной  ДНК  методом  саузерн-блота.  Подтверждением  нуклеотидной
последовательности  экспрессирующей  конструкции  может  быть  уровень
экспрессии и характеристика очищенного белка. При выявлении каких-либо
различий между запланированным и полученным вариантами нуклеотидных
последовательностей,  необходимо  их  чёткое  обозначение,  обоснование
допустимости  различий  и  представление  данных  о  том,  что  они  являются
устойчивыми и способными к постоянной экспрессии целевого белка;

В нормативной документации должны быть указаны методы контроля

соответствующих показателей.

Если создается только РБК, исследования должны проводиться для

каждого нового РБК.

Происхождение, описание, методы и результаты испытаний, хранение,