Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

ХРОМОГЕННЫЕ МЕТОДЫ (D и E)

Хромогенные методы используют для измерения количества

хромофора,  высвободившегося  из  хромогенного  субстрата  в  результате
реакции  эндотоксинов  с  лизатом  амебоцитов.  В  зависимости  от  принципа,
положенного  в  основу  испытания,  этот  метод  может  быть  проведен  как
хромогенный  тест  по  конечной  точке  или  как  хромогенный  кинетический
анализ.

Хромогенный тест по конечной точке (Метод Е) основан на измерении

интенсивности  окраски  реакционной  смеси,  зависящей  от  количества
хромофора,  высвободившегося  в  конце  инкубационного  периода.
Количество,  выделившегося  хромофора,  зависит  от  концентрации
эндотоксина.

В процессе испытания хромогенным кинетическим методом (метод D)

определяют  скорость  развития  окраски  реакционной  смеси,  измеряемой  по
времени,  необходимому  для  достижения  заданной  величины  оптической
плотности реакционной смеси.

Испытание

проводят

при

температуре

инкубирования,

рекомендованной производителем лизата амебоцитов (обычно 37

С).

ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ АНАЛИЗЫ
Для подтверждения достоверности и точности испытания

турбидиметрическим или хромогенным методом проводят предварительные
анализы, позволяющие убедиться в достоверности критериев для
стандартной кривой и в том, что испытуемый раствор не содержит факторов,
мешающих проведению реакции.

При внесении любых изменений, способных повлиять на результаты

эксперимента, требуется дополнительное подтверждение достоверности и
точности испытания.

Проверка достоверности критериев стандартной кривой

Анализ проводят для каждой новой серии лизата амебоцитов.