Особенности измерения активности ферментов, описываемые в
фармакопейных статьях, определяется их принадлежностью к тому или
иному классу.
Принцип, положенный в основу всех методов определения активности
фермента (
Е
), заключается в регистрации скорости убыли субстрата (
S
) (то
есть вещества, на которое действует фермент) или скорости образования
продукта реакции (
P
).
Простейшей схемой для описания кинетики ферментативных реакций
является так называемая двухстадийная схема:
(1)
где:
Е
– фермент;
S
– субстрат;
P
– продукты реакции;
k
кат
– каталитическая константа.
Начальная скорость (
υ
o
) катализируемой ферментом реакции, при
которой расходом субстрата можно пренебречь, описывается уравнением
Михаэлиса–Ментен (2):
υ
o
=
k
кат
∙
[
E
]
0
∙
[
S
]
0
=
V
макс
∙
[
S
]
0
,(2)
K
м
+ [
S
]
0
K
м
+ [
S
]
0
где:
V
макс
=
0
кат
]
[
k
E
´
–
максимальная скорость реакции;
[
E
]
0
–
начальная концентрация фермента;
K
м
–
константа Михаэлиса.
Для аллостерических ферментов начальная скорость ферментативной
реакции не подчиняется уравнению Михаэлиса–Ментен.
Для определения скорости ферментативной реакции через
определенные промежутки времени отбирают пробы из реакционной смеси и
E
+
S
ES
E
+
P,
k
кат
Предыдущая < | 1326 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF