Электрофорез белков в полиакриламидных гелях с натрия додецилсульфатом

макромолекул.  Существуют  пределы  концентраций  акриламида,  которые
могут  использоваться.  При  высоких  концентрациях  акриламида  гели
становятся более ломкими и трудны в обращении. С уменьшением размера
пор  геля  уменьшается  скорость  перемещения  белка  через  гель.  Регулируя
размер  пор  геля  путем  изменения  концентрации  акриламида,  можно
оптимизировать  разрешающую  способность  метода  для  конкретного
анализируемого  образца.  Таким  образом,  физическое  состояние  ПААГ
характеризуется  по  составу  акриламида  и  бисакриламида.  Обычно
используются гели, в которых общая концентрация мономера и сшивающего
агента находится в диапазоне от 3 до 30 %, а количество сшивающего агента
обычно  составляет  от  одной  десятой  до  одной  двадцатой  от  количества
мономера. При этом содержание сшивающего агента тем меньше, чем выше
общая концентрация геля.

Электрофорез белков в полиакриламидных гелях с натрия

додецилсульфатом

Электрофорез в полиакриламидных гелях с использованием натрия

додецилсульфата (SDS) – наиболее распространенный способ электрофореза,
используемый  для  оценки  подлинности  и  чистоты  белковых  продуктов.
Денатурированные  под  воздействием  высокой  температуры  полипептиды,
связываясь  с  анионным  детергентом  SDS,  становятся  отрицательно
заряженными  и  приобретают  конформацию,  при  которой  радиус  Стокса
является  функцией  молекулярной  массы  независимо  от  типа  белка.
Поскольку  количество  связанного  SDS  почти  всегда  пропорционально
молекулярной  массе  полипептида  и  не  зависит  от  последовательности
аминокислот  в  полипептиде,  SDS-полипептидные  комплексы  мигрируют
через  полиакриламидные  гели  с  подвижностью,  прямо  пропорциональной
молекулярной массе полипептида.

Молекулярная масса белка может быть оценена по его относительной

подвижности на прокалиброванном геле, и обнаружение отдельной полосы в
таком геле является критерием чистоты.