background image

скорость миграции наиболее подвижных макромолекул пробы должна быть 
несколько ниже, чем у молекул красителя. Когда фронт красителя достигает 
противоположной границы геля, электрофорез прекращают. 

Разделившиеся  зоны  биополимеров  во  избежание  их  диффузии 

немедленно  фиксируют.  Для  этого  гель  извлекают  из  стеклянной  формы  и 
выдерживают в смеси кислоты со спиртом так, что белки или нуклеиновые 
кислоты  фиксируются  в  том  самом  месте,  где  закончилась  их  миграция. 
После фиксации  или одновременно с ней проводят окрашивание зон путем 
выдерживания геля в растворе красителя, прочно связывающегося с белком 
или нуклеиновой кислотой. Излишек красителя удаляют. 

Вместо  окрашивания  или  наряду  с  ним  могут  использоваться 

радиоактивные  метки  и  приемы  регистрации  полос  на  фотопленке 
посредством  авторадиографии  или  флюорографии  и  различные  способы 
счета  радиоактивности  в  геле  с  помощью  жидкостных  сцинтилляционных 
счетчиков. 

Характеристики полиакриламидных гелей 

Гель  полиакриламида  имеет  ряд  преимуществ,  определяющих  его 

широкое  использование.  Он  прозрачен,  химически  стабилен,  инертен, 
устойчив  к  изменениям  рН  и  температуры,  нерастворим  в  большинстве 
растворителей,  и,  наконец,  в  нем  практически  отсутствуют  адсорбция  и 
электроосмос.

 

Разделяющие свойства полиакриламидных гелей (ПААГ) определяются 

трехмерной  сетью  волокон  и  пор,  которая  сформирована  за  счет 
бифункциональных 

бисакриламидных 

связей 

между 

смежными 

полиакриламидными  цепями.  Полимеризация  катализируется  системой, 
производящей свободные радикалы, составленной из аммония персульфата и 
тетраметилэтилендиамина. 

С увеличением концентрации акриламида в геле эффективный размер 

пор  уменьшается.  Эффективный  размер  пор  геля  определяет  его 
разделяющие  свойства,  то  есть  сопротивление  геля  к  перемещению 

Предыдущая <  | 651  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF