скорость миграции наиболее подвижных макромолекул пробы должна быть
несколько ниже, чем у молекул красителя. Когда фронт красителя достигает
противоположной границы геля, электрофорез прекращают.
Разделившиеся зоны биополимеров во избежание их диффузии
немедленно фиксируют. Для этого гель извлекают из стеклянной формы и
выдерживают в смеси кислоты со спиртом так, что белки или нуклеиновые
кислоты фиксируются в том самом месте, где закончилась их миграция.
После фиксации или одновременно с ней проводят окрашивание зон путем
выдерживания геля в растворе красителя, прочно связывающегося с белком
или нуклеиновой кислотой. Излишек красителя удаляют.
Вместо окрашивания или наряду с ним могут использоваться
радиоактивные метки и приемы регистрации полос на фотопленке
посредством авторадиографии или флюорографии и различные способы
счета радиоактивности в геле с помощью жидкостных сцинтилляционных
счетчиков.
Характеристики полиакриламидных гелей
Гель полиакриламида имеет ряд преимуществ, определяющих его
широкое использование. Он прозрачен, химически стабилен, инертен,
устойчив к изменениям рН и температуры, нерастворим в большинстве
растворителей, и, наконец, в нем практически отсутствуют адсорбция и
электроосмос.
Разделяющие свойства полиакриламидных гелей (ПААГ) определяются
трехмерной сетью волокон и пор, которая сформирована за счет
бифункциональных
бисакриламидных
связей
между
смежными
полиакриламидными цепями. Полимеризация катализируется системой,
производящей свободные радикалы, составленной из аммония персульфата и
тетраметилэтилендиамина.
С увеличением концентрации акриламида в геле эффективный размер
пор уменьшается. Эффективный размер пор геля определяет его
разделяющие свойства, то есть сопротивление геля к перемещению
Предыдущая < | 651 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF