Приготовление концентрирующего геля

разделяющий гель, а затем сверху наслаивают концентрирующий гель.

Приготовление разделяющего геля

В конической колбе готовят рассчитанное в зависимости от объема

ячейки количество раствора для разделяющего геля, содержащего требуемую
концентрацию акриламида, используя значения, приведенные в Таблице 1.
Смешивают компоненты в указанном порядке. В тех случаях, где требуется,
перед

добавлением

раствора

аммония

персульфата

тетраметилэтилендиамина (TEMED) раствор фильтруют, и, если необходимо,
дегазируют раствор через мембрану из ацетата целлюлозы (с диаметром пор
0,45  мкм)  под  вакуумом  при  перемешивании.  Добавляют  соответствующие
количества раствора аммония персульфата и TEMED как указано в табл. 1,
перемешивают  и  немедленно  заливают  в  промежуток  между  двумя
стеклянными  пластинами  ячейки.  Оставляют  достаточное  место  для
концентрирующего  геля  (длина  зубцов  гребенки  плюс  1  см).  Используя
суженную стеклянную пипетку, тщательно наслаивают на гель сверху воду
или изобутанол. Оставляют гель в вертикальном положении при комнатной
температуре до завершения полимеризации.

Приготовление концентрирующего геля

После окончания полимеризации воду или изобутанол сливают и

промывают верхнюю часть геля несколько раз водой, чтобы удалить остатки
неполимеризованного акриламида и изобутанола, если он использовался.
Сливают с верхней части геля так много жидкости, как только возможно и
затем удаляют любую оставшуюся влагу фильтровальной бумагой.

В конической колбе готовят соответствующее количество раствора,

содержащего  требуемую  концентрацию  акриламида,  используя  значения,
приведенные  в  табл.  2.  Смешивают  компоненты  в  том  же  порядке  и  с
использованием  тех  же  приемов  фильтрации  и  дегазирования,  что  и  для
разделяющего геля. После добавления соответствующих количеств раствора
аммония  персульфата  и  TEMED,  как  указано  в  табл.2,  перемешивают  и
немедленно заливают в промежуток между двумя стеклянными пластинами