соответствующих 4-6 уровням концентрации, и строят экспериментальные
зависимости площадей пиков аминокислот от их концентраций в
соответствующих стандартных растворах. Полученные калибровочные
зависимости аппроксимируют линейной функцией (исключение составляют
зависимости, полученные с использованием испарительного детектора
светорассеяния или детектора заряженного аэрозоля) и используют для
расчета концентраций аминокислот, присутствующих в исследуемом
образце. Калибровочные зависимости, должны часто обновляться и
проверяться путем анализа контрольных образцов для обеспечения
достоверности получаемых результатов.
Для получения точных и повторяемых результатов важно, чтобы
аналитик готовил образцы для аминокислотного анализа таким образом,
чтобы они соответствовали области применимости методики (например,
ожидаемые концентрации аминокислот в испытуемом образце находились
бы в рамках линейных рабочих диапазонов методики для каждой
аминокислоты). При проведении рутинного анализа может использоваться
одноточечная калибровка, когда концентрация аминокислот в используемом
стандартном растворе соответствует типичным ожидаемым концентрациям
аминокислот в испытуемом растворе.
Пробоподготовка
Получение точных результатов аминокислотного анализа требует
дополнительной очистки испытуемых образцов белков и пептидов.
Буферные компоненты (например, соли, мочевина, детергенты) могут
оказывать мешающее влияние и удаляются из образца перед анализом. В
методиках, использующих пост-колоночную дериватизацию аминокислот,
мешающее влияние буферных компонентов обычно проявляется менее
выражено, чем в методиках, основанных на предколоночной дериватизации.
В ходе пробоподготовки желательно ограничить количество манипуляций с
образцами, чтобы уменьшить потенциальное фоновое загрязнение, улучшить
Предыдущая < | 679 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF