Для контроля возможных физических и химических потерь

значение  открываемости,  рассчитанное  для  определяемых  аналитов,  и
сократить  трудозатраты.  Общие  методы,  используемые  для  удаления
буферных компонентов из испытуемых образцов, включают следующие: (1)
полупрепаративное  ОФ-ВЭЖХ  разделение  белка  и  компонентов  пробы,
элюирование  белка  с  колонки  легкоиспаряющимся  элюентом,  содержащим
достаточную  долю  органического  растворителя,  и  сушку  полученного
образца  элюата  вакуумным  центрифугированием;  (2)  диализ  с
использованием  буферного  раствора  на  основе  легколетучих  компонентов,
или  воды;  (3)  центробежная  ультрафильтрация  для  замены  буфера
легколетучим  буферным  раствором  или  водой;  (4)  осаждение  белка  из
буфера  с  использованием  органического  растворителя  (например,  ацетона);
(5) полупрепаративная гель-фильтрация.

Внутренний стандарт

Для контроля возможных физических и химических потерь, а также

возможных  отклонений  во  время  аминокислотного  анализа,  рекомендуется
использовать внутренний стандарт. Точно известное количество внутреннего
стандарта  может  быть  добавлено  к  раствору  белка  до  гидролиза.  Значение
открываемости  рассчитанное  для  внутреннего  стандарта  теоретически
соответствует  общему  значению  открываемости  для  аминокислот  в
гидролизате испытуемого образца белка. Свободные аминокислоты, однако,
во  время  гидролиза  ведут  себя  несколько  иначе,  по  сравнению  с
аминокислотами  в составе белка, скорости высвобождения  или  разрушения
которых  в  ходе  гидролиза  непостоянны.  По  этой  причине  использование
внутреннего  стандарта  для  учета  потерь  при  гидролизе  может  дать
ненадежные  результаты,  что  необходимо  учитывать.  Внутренний  стандарт
также может быть добавлен к смеси аминокислот после гидролиза для учета
возможной  нестабильности  реагентов  (протекания  реакции  дериватизации),
производных аминокислот, а также нестабильности работы прибора в целом.