Гидролиз белка

В идеале внутренний стандарт представляет собой первичную

аминокислоту  небелкового  происхождения,  которая  является  коммерчески
доступной  и  недорогой.  Внутренний  стандарт  должен  быть  стабильным  во
время гидролиза, его фактор отклика должен быть постоянным в диапазоне
определяемых  концентраций  целевых  аминокислот,  кроме  того  пик
внутреннего  стандарта  на  хроматограмме  должен  обладать  уникальным
временем  удерживания  и  разрешаться  с  пиками  других  аминокислот.  На
практике  в  качестве  внутреннего стандарта  обычно используют  норлейцин,
нитротирозин и α-аминомасляную кислоту.

Гидролиз белка

Во избежание ошибочных результатов, стеклянная посуда,

используемая для гидролиза белков и пептидов, должна быть очень чистой.
Пудра  с  перчаток  и  отпечатки  пальцев  на  флаконах  для  гидролиза  могут
вызвать загрязнение пробы. Для очистки стеклянных флаконов для гидролиза
необходимо прокипятить их в течение 1 ч в 1 М хлористоводородной кислоте
или  замочить  в  концентрированной  азотной  кислоте  или  в  смеси  равных
объемов  концентрированных  хлористоводородной  и  азотной  кислот.
Очищенные  вышеописанным  способом  флаконы  для  гидролиза  промывают
высокочистой  водой,  затем  споласкивают  метанолом  класса  чистоты  «для
ВЭЖХ»,  сушат  в  течение  ночи  в  сушильном  шкафу  и  хранят  закрытыми
вплоть до использования. Альтернативно для устранения загрязнений может
быть  использован  пиролиз  чистой  стеклянной  посуды  при  температуре
500 °C  в  течение  4 ч.  Также  возможно  использование  адекватной
одноразовый лабораторный посуды.

Кислотный гидролиз является наиболее распространенным способом

гидролиза  образца  белка  перед  аминокислотным  анализом.  Метод
кислотного гидролиза может способствовать ухудшению воспроизводимости
результатов  анализа  из-за  полного  или  частичного  разрушения  некоторых
аминокислот:  триптофан  разрушается;  серин  и  треонин  частично