background image

гидролиза  также  используются  в  случае  аминокислот,  которые  медленно 
высвобождаются  (например,  изолейцин  и  валин).  При  проведении 
продолжительного  гидролиза,  аналитик  будет  наблюдать  на  кинетических 
кривых  появление  плато,  соответствующего  максимально  возможному 
высвобождению  данных  аминокислот.  Если  время  гидролиза  слишком 
велико,  максимальная  достигнутая  концентрация  аминокислот  в  растворе 
начнет уменьшаться, указывая на их разрушение в условиях гидролиза. 

Приемлемой  альтернативой  проведению  кинетических  исследований 

является  проведение  гидролиза  стандарта  аминокислот  с  известными 
концентрациями в тех же условиях, что и для испытуемого образца. Скорость 
разрушения  аминокислот  в  свободной  форме  может  не  полностью 
соответствовать  скорости  разрушения  лабильных  аминокислот  в  составе 
пептида  или  белка  во  время  гидролиза.  Это  особенно  справедливо  для 
пептидных связей, которые медленно гидролизуются (например, связи Иле-
Вал).  Тем  не  менее,  этот  метод  позволяет  аналитику  учесть  часть  потерь 
аминокислот в процессе гидролиза.  

Кислотный  гидролиз  под  воздействием  микроволнового  излучения 

также  используется  и  характеризуется  быстротой,  однако  требует 
специального  оборудования,  а  также  специальных  мер  предосторожности. 
Оптимальные  условия  для  микроволнового  кислотного  гидролиза  должны 
подбираться для каждого отдельного образца белковой / пептидной природы. 
Продолжительность  микроволнового  гидролиза  обычно  составляет  лишь 
несколько минут, однако даже небольшие отклонения во времени гидролиза 
могут привести к неудовлетворительным результатам (например, неполному 
гидролизу  или  разрушению  лабильных  аминокислот).  Полный  протеолиз  с 
применением  смеси  протеаз  также  может  использоваться  для 
аминокислотного  анализа,  однако  является  слишком  сложным,  требует 
надлежащего  контроля  и  обычно  больше  подходит  для  пептидов,  чем  для 
белков. 

Предыдущая <  | 683  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF