гидролиза также используются в случае аминокислот, которые медленно
высвобождаются (например, изолейцин и валин). При проведении
продолжительного гидролиза, аналитик будет наблюдать на кинетических
кривых появление плато, соответствующего максимально возможному
высвобождению данных аминокислот. Если время гидролиза слишком
велико, максимальная достигнутая концентрация аминокислот в растворе
начнет уменьшаться, указывая на их разрушение в условиях гидролиза.
Приемлемой альтернативой проведению кинетических исследований
является проведение гидролиза стандарта аминокислот с известными
концентрациями в тех же условиях, что и для испытуемого образца. Скорость
разрушения аминокислот в свободной форме может не полностью
соответствовать скорости разрушения лабильных аминокислот в составе
пептида или белка во время гидролиза. Это особенно справедливо для
пептидных связей, которые медленно гидролизуются (например, связи Иле-
Вал). Тем не менее, этот метод позволяет аналитику учесть часть потерь
аминокислот в процессе гидролиза.
Кислотный гидролиз под воздействием микроволнового излучения
также используется и характеризуется быстротой, однако требует
специального оборудования, а также специальных мер предосторожности.
Оптимальные условия для микроволнового кислотного гидролиза должны
подбираться для каждого отдельного образца белковой / пептидной природы.
Продолжительность микроволнового гидролиза обычно составляет лишь
несколько минут, однако даже небольшие отклонения во времени гидролиза
могут привести к неудовлетворительным результатам (например, неполному
гидролизу или разрушению лабильных аминокислот). Полный протеолиз с
применением смеси протеаз также может использоваться для
аминокислотного анализа, однако является слишком сложным, требует
надлежащего контроля и обычно больше подходит для пептидов, чем для
белков.
Предыдущая < | 683 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF