Парофазный гидролиз

Для выбора оптимальных условий гидролиза в ходе первоначального

анализа белка неизвестного состава, варьируют продолжительность
гидролиза и температуру его проведения.

МЕТОД 1

Кислотный гидролиз с использованием хлористоводородной кислоты,

содержащей фенол, является наиболее общей процедурой, используемой для
гидролиза белка/пептида при аминокислотном анализе. Добавление фенола
предотвращает реакцию галогенирования тирозина.

Гидролизующий раствор

. 6 М кислота хлороводородная, содержащая от

0,1 % до 1,0 % фенола.

Выполнение гидролиза

Гидролиз в жидкой фазе

. Образец белка или пептида помещают в

ампулу для гидролиза и высушивают (образец сушат  для того, чтобы вода,
содержащаяся  в  образце,  не  разбавляла  гидролизующий  раствор).
Прибавляют  гидролизующий  раствор  из  расчета  200 мкл  на  500 мкг
лиофилизированного белка. Образец в ампуле замораживают в бане с сухим
льдом  и  ацетоном  (-78 °С)  и  запаивают  ампулу  под  вакуумом  при  помощи
пламени.  Образцы  обычно  гидролизуют  при  температуре  110 °С  в  течение
24 ч  в  вакууме  или  в  атмосфере  инертного  газа  для  предотвращения
окисления.  Если  есть  подозрение,  что  испытуемый  белок  полностью  не
гидролизуется, рассматривают возможность проведения гидролиза в течение
более продолжительного времени (например, 48 ч и 72 ч).

Парофазный гидролиз

. Является одним из наиболее общих методов

кислотного  гидролиза.  Предпочтителен  для  микроанализа,  когда  доступны
лишь  небольшие  количества  образца.  При  использовании  парофазного
гидролиза  загрязнение  образца  кислотными  реактивами  минимизировано.
Флаконы  с  высушенными  образцами  помещают  в  сосуд,  содержащий
подходящее

количество

гидролизующего

раствора

так,

чтобы

гидролизующий раствор не контактировал с испытуемым образцом. В