Окисляющий раствор

помещают  в  ампулу  большего  размера,  содержащую  около  200 мкл
гидролизующего раствора. Ампулу большего размера герметично запаивают
в  вакууме  (около  0,05 мм рт. ст.  или  6,7 Па).  Гидролиз  проводят  при
температуре  166 °С  в  течение  15  –  30 мин.  После  гидролиза  для  удаления
остатков  кислоты  ампулу  с  образцом  сушат  в  вакууме  в  течение  5 мин.
Значение

открываемости,

рассчитанное

для

триптофана

после

количественного определения, может зависеть от количества испытуемого
образца взятого для гидролиза.

МЕТОД 4

Перед гидролизом белка выполняют окисление цистеина/цистина и
метионина при помощи надмуравьиной кислоты.

Окисляющий раствор

. Используют свежеприготовленный раствор

надмуравьиной кислоты, полученный в результате смешения 1 объема 30 %
раствора водорода пероксида и 9 объемов муравьиной кислоты безводной и
выдерживания при комнатной температуре в течение 1 ч.

Методика.

Образец белка/пептида растворяют в 20 мкл муравьиной кислоты

безводной, нагревают при температуре 50 °С в течение 5 мин и прибавляют
100 мкл окисляющего раствора. Процесс окисления проводят в течение 10 –
30 мин. В данной реакции цистеин превращается в цистеиновую кислоту, а
метионин – в метионинсульфон. Избыток реактива удаляют из образца при
помощи вакуумного центрифугирования. Окисленный белок может быть
затем гидролизован по Методу 1 или Методу 2. При наличии галогенидов эта
методика может приводить к модификации тирозина.

МЕТОД 5

Окисление цистеина/цистина происходит во время жидкофазного гидролиза
в присутствии азида натрия.