Восстанавливающие растворы

приводит  к  получению  диаминопропионовой  кислоты  и  диаминомасляной
кислоты,  соответственно.  Эти  превращения  позволяют  определять  в
белке/пептиде  содержание  аспарагина  и  глутамина  в  присутствии  остатков
аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты.

Восстанавливающие растворы

. Готовят и фильтруют 3 раствора: 10 мМ

раствор трифторуксусной кислоты (раствор А); 5 М раствор гуанидина
гидрохлорида, содержащий 10 мМ трифторуксусной кислоты (раствор В);
свежеприготовленный

раствор

36 мг/мл

бис-(1,1-трифторацетокси)-

йодбензола в диметилформамиде (раствор С).

Методика

. Около 200 мкг испытуемого образца помещают в чистую ампулу

для гидролиза и прибавляют 2 мл раствора А или раствора В и 2 мл раствора
С.  Ампулу  для  гидролиза  герметично  запаивают  в  вакууме.  Полученный
образец выдкрживают в течение 4 ч при температуре 60 °С в защищенном от
света месте. Затем образец подвергают диализу водой для удаления избытка
реактивов.  Диализированный  образец  трижды  экстрагируют  равными
объемами  бутилацетата  и  лиофилизируют.  Белок  затем  может  быть
гидролизован  согласно  описанным  ранее  методикам.  Пики  α,β-
диаминопропионовой и α,γ-диаминомасляной кислот обычно не отделяются
от  пика  лизина  при  ионохроматографическом  разделении.  Таким  образом,
при  использовании  ионообменной  хроматографии  для  разделения
аминокислот  содержание  аспарагина  и  глутамина  представляет  собой
разницу  между  содержаниями  аспарагиновой  и  глутаминовой  кислот,
полученными  в  кислотных  гидролизатах  образцов  белка/пептида  без
предварительной дериватизации бис-(1,1-трифторацетокси)-йодбензолом и с
дериватизацией  бис-(1,1-трифторацетокси)-йодбензолом.  Определяемое
содержание  треонина,  метионина,  цистеина,  тирозина  и  гистидина  может
изменяться  при  проведении  дериватизации  бис-(1,1-трифторацетокси)-
йодбензолом;  при  необходимости  определения  этих  аминокислотных
остатков  следует  проводить  гидролиз  белка/пептида  без  предварительной
дериватизации бис-(1,1-трифторацетокси)-йодбензолом.