Восстанавливающий раствор

20 нмоль испытуемого образца белка. Для прекращения реакции прибавляют
избыток  2-меркаптоэтанола.  Обессоливают  белок/пептид  методом
обращенно-фазовой  ВЭЖХ,  собирая  белковую/пептидную  фракцию.  Перед
кислотным  гидролизом  собранный  образец  может  быть  высушен  при
помощи  вакуумного  центрифугирования.  В  процессе  кислотного  гидролиза
полученный  S-карбоксиамидометилцистеин  будет  превращаться  в  S-
карбоксиметилцистеин.

МЕТОД 10

Цистеин/цистин,  прореагировавший  с  дитиогликолевой  кислотой  или
дитиодипропионовой  кислотой,  образует  смешанный  дисульфид.  Выбор
дитиогликолевой  кислоты  или  дитиодипропионовой  кислоты  зависит  от
требуемого  разрешения  пиков  в  хроматографической  методике
аминокислотного анализа.

Восстанавливающий раствор

. Раствор 10 г/л дитиогликолевой кислоты

(или дитиодипропионовой кислоты) в 0,2 М растворе натрия гидроксида.

Методика

. Около 20 мкг испытуемого образца помещают в ампулу для

гидролиза  и  прибавляют  5 мкл  восстанавливающего  раствора.  Прибавляют
10 мкл  изопропилового  спирта  и  удаляют  всю  жидкость  из  образца  при
помощи  вакуумного  центрифугирования.  Образец  гидролизуют,  используя
Метод 1.  Преимущество  данного  метода  заключается  в  том,  что  остатки
других  аминокислот  не  участвуют  в  побочных  реакциях,  а  образец  не
нуждается в обессоливании перед гидролизом.

МЕТОД 11

Аспарагин и глутамин в процессе кислотного гидролиза превращаются в
аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту, соответственно. Аспарагин
и глутамин в составе белков/пептидов могут взаимодействовать с бис-(1,1-
трифторацетокси)-йодбензолом, что при последующем кислотном гидролизе