Предел обнаружения для большинства ОФА-производных аминокислот

тиольных соединений, таких как N-ацетил-L-цистеин или 2-меркаптоэтанол.
Длительное воздействие натрия гипохлорита или хлорамина Т не оказывает
заметного влияния на дериватизацию первичных аминокислот.

Разделение аминокислот на ионообменной колонке достигается

подбором  рН  и  ионной  силы.  После  пост-колоночной  дериватизации
элюируемых  аминокислот  с  ОФА  продукты  реакции  проходят  через
флуориметрический  детектор.  Интенсивность  флуоресценции  ОФА-
производных аминокислот измеряется при длине волны возбуждения 348 нм
и длине волны эмиссии 450 нм.

обычно составляет несколько десятков пмоль. Линейность сигнала
наблюдается в области от нескольких пмоль до нескольких десятков нмоль.
Для получения удовлетворительных результатов рекомендуется использовать
для гидролиза образцы белка/пептида массой более 500 нг.

МЕТОД 3. Предколоночная дериватизация с фенилизотиоционатом
(ФИТЦ)

Фенилизотиоцианат (ФИТЦ) реагирует с аминокислотами с

образованием фенилтиокарбамильных (ФТК) производных, которые
детектируются с высокой чувствительностью при длине волны 254 нм.

После удаления реактива под вакуумом ФТК-производные

аминокислот могут храниться в сухом состоянии в морозильнике в течение
нескольких недель без заметной деградации. Готовый раствор пробы для
анализа может храниться в течение 3 дней в холодильнике без заметных
изменений хроматографического сигнала.

Разделение ФТК-производных аминокислот методом обращенно-

фазовой ВЭЖХ на колонке, заполненной октадецилсиликагелем, достигается
путем подбора концентрации ацетонитрила в подвижной фазе и ионной силы
буферного раствора. Элюируемые из колонки ФТК-производные
аминокислот детектируются при длине волны 254 нм.