Предколоночная дериватизация с 6-аминохинолил

Предел обнаружения для большинства ФТК-производных аминокислот

обычно составляет 1 пмоль. Линейность сигнала наблюдается в области 20 –
500 пмоль с коэффициентом корреляции более 0,999. Для получения
удовлетворительных результатов рекомендуется использовать для гидролиза
образцы белка/пептида массой более 500 нг.

МЕТОД 4. Предколоночная дериватизация с 6-аминохинолил-N-
гидроксисукцинимидилкарбаматом (АХК)

АХК реагирует с аминокислотами с образованием стабильных

флуоресцирующих несимметричных производных мочевины (АХК-
аминокислот), которые определяют методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с
флуориметрическим детектированием.

Разделение АХК-производных аминокислот методом обращенно-

фазовой ВЭЖХ на колонке, заполненной октадецилсиликагелем, достигается
подбором  концентрации  ацетонитрила  в  подвижной  фазе  и  ионной  силы
буферного  раствора.  Селективное  флуоресцентное  детектирование
производных  при  длине  волны  возбуждения  250 нм  и  при  длине  волны
эмиссии  395 нм  допускает  прямой  ввод  реакционной  смеси  без
существенного  мешающего  влияния  единственного  флуоресцирующего
побочного продукта разложения АХК – 6-аминохинолина. Избыток реактива
быстро  гидролизуется  (t

1/2

< 15 с) с образованием 6-аминохинолина, N-

гидроксисукцинимида и диоксида углерода, а через 1 мин образование
производных становится невозможным.

Площади пиков для АКХ-аминокислот, не изменяются значимо, по

меньшей мере, в течение 1 недели при хранении растворов при комнатной
температуре. Следовательно, АХК-аминокислоты обладают более чем
достаточной

стабильностью

для

проведения

круглосуточного

автоматического хроматографического анализа. Предел обнаружения для