Предколоночная дериватизация с (диметиламино)

равные  промежутки  времени  после  ее  завершения,  что  минимизирует
вариабельность  получаемых  результатов,  связанную  с  нестабильностью
ОФА-производных аминокислот во времени. Интенсивность флуоресценции
ОФА-производных  аминокислот  измеряют  при  длине  волны  возбуждения
348 нм и длине волны эмиссии 450 нм.

Заявленный

предел

обнаружения

при

флуориметрическом

детектировании составляет около 50 фмоль, однако на практике предел
обнаружения остается на уровне 1 пмоль.

Реагентом-аналогом ОФА является 2,3-нафталиндиальдегид (НДА),

который также успешно используется для предколоночной дериватизации
аминокислот. Преимуществом НДА-производных аминокислот является их
относительная стабильность по сравнению с ОФА-производными.

МЕТОД 6. Предколоночная дериватизация с (диметиламино)-
азобензолсульфонилхлоридом (ДАБС-Cl)

Производные аминокислот с ДАБС-Cl (ДАБС-аминокислоты),

обладают  высокой  стабильностью  и  имеют  максимум  поглощения  при
436 нм  в  видимой  области  спектра.  ДАБС-производные  всех  аминокислот
белкового  происхождения,  могут  быть  разделены  на  колонке,  заполненной
октадецилсиликагелем,

методом

обращенно-фазовой

ВЭЖХ

использованием градиентного элюирования и подвижной фазы, состоящей из
ацетонитрила и водного буферного раствора.

Метод позволяет проводить с одинаковой чувствительностью анализ

как  аминокислот,  так  и  иминокислот  (таких  как  пролин).  Метод
дериватизации  с  ДАБС-Cl  позволяет  количественно  определять  остатки
триптофана,  полученные  при  гидролизе  белка/пептида  с  сульфоновыми
кислотами

(такими

как

меркаптоэтансульфоновая,

кислота

п-

толуолсульфоновая или метансульфоновая кислота) как указано в методе 2,
описанном в разделе «Гидролиз белка». Другие лабильные остатки
аминокислот, такие как аспарагин и глутамин, можно анализировать, как и