Дериватизация фторенилметилхлорформиатом

прежде, после их превращения, соответственно, в диаминопропионовую и
диаминомасляную кислоты под действием бис-(1,1-трифторацетокси)-
йодбензола, как указано в методе 11, описанном в разделе «Гидролиз белка».

В качестве внутреннего стандарта для этого метода не может быть

использован норлейцин, так как его производное элюируется в области
хроматограммы со скоплением пиков производных первичных аминокислот.
В качестве внутреннего стандарта используют нитротирозин, который
элюируется в свободной от пиков области хроматограммы.

Предел обнаружения ДАБС-аминокислот обычно составляет 1 пмоль.

Предел количественного определения ДАБС-аминокислот составляет 2 –
5 пмоль. Для проведения одного анализа требуется всего лишь 10 – 30 нг
дериватизированного ДАБС-Cl белкового гидролизата.

МЕТОД 7.

Предколоночная

дериватизация

фторенилметилхлорформиатом

ФМОК-Cl взаимодействует с первичными и вторичными

аминокислотами  с  образованием  производных  с  сильной  флуоресценцией.
Реакция  протекает  в  мягких  условиях  в  водном  растворе  в  течение  30 с.
Получаемые  производные  аминокислот  стабильны,  за  исключением
производных  гистидина,  подвергающихся  постепенной  деградации.
Несмотря  на  то,  что  ФМОК-Cl  сам  по  себе  обладает  флуоресценцией,
избыток  реагента  и  флуоресцирующие  побочные  продукты  реакции  могут
быть  удалены  из  реакционной  смеси  без  потерь  ФМОК-производных
аминокислот.

ФМОК-аминокислоты могут быть разделены на колонке, заполненной

октадецилсиликагелем,  методом  обращенно-фазовой  ВЭЖХ.  Разделение
проводят по программе градиентного элюирования с линейным изменением
состава  подвижной  фазы  от  смеси  «ацетонитрил  :  метанол  :  ацетатный
буферный  раствор»  (10:40:50  (об./об./об.))  до  смеси  «ацетонитрил  :
ацетатный  буферный  раствор»  (50:50  (об./об.)),  что  позволяет  разделить  20