Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

прочно связывают в ней воду. Возможно также использование других
криопротекторов.

Для криоконсервации клетки ресуспендируют в смеси, состоящей из

80 % питательной ростовой среды, 10 % сыворотки крови крупного рогатого
скота, 10% глицерина (или ДМСО), разливают в ампулы, вместимостью 2,0
или  5,0  мл  и  замораживают  в  сосудах  Дюара  с  жидким  азотом.  При
замораживании температуру снижают постепенно на 1 °С в минуту до минус
25  ºС,  затем  до  минус  70  ºС.  Возможно  использование  других  методов
криоконсервации.  Клеточные  культуры  могут  храниться  при  температуре
минус 196 °С в течение 10 и более лет.

После размораживания следует исследовать жизнеспособность клеток,

определяя  их  количество  путем  подсчета  живых  и  погибших  клеток  после
окрашивания.  Для  определения  физиологического  состояния  клеток
«сохранные/«поврежденные»  широко  применяется  окрашивание  0,1  %
раствором трипанового синего в гемоцитометрах.

6. Методы испытания клеточных культур
Морфология

Для морфологического изучения клеточные культуры выращивают на

предметных или покровных стеклах в течение 48-72 ч, фиксируют 96 %
этиловым спиртом или жидкостью Карнуа в течение 10 -15

мин при

температуре от 20 до 22

С, окрашивают гематоксилин-эозином или азур-

эозином и просматривают в световом микроскопе. В нормативной
документации могут быть указаны иные условия приготовления препаратов.
Определяют

тип

роста

клеток

(эпителиоподобный

или

фибробластоподобный), гомогенность цитоплазмы, наличие эозинофильных
включений, характерные особенности ядра, ядрышек и др. органелл.

Необходимо также описывать оптимальные условия и способ

культивирования:  стационарный,  роллерный,  суспензионный  или
псевдосуспензионный,  на  микроносителях  (декстрановых,  покрытых
коллагеном  или  желатином,  целлюлозных  или  полистироловых).  Должны