Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Для исследования адгезии используют суточные культуры испытуемых

штаммов.

Суточную чистую культуру исследуемого штамма, выращенную на

скошенной адекватной питательной среде, смывают ЗФР, pH 7,2 и затем
дважды отмывают ЗФР путем центрифугирования (1500 об/мин в течение 10
мин).

Испытуемые культуры можно также выращивать на плотной среде,

покрытой целлофаном, при температуре 37 °С в течение 16–18 ч. После этого
готовят суспензию, содержащую 2

∙

КОЕ/мл. Подготовленные таким

образом культуры, выращенные на целлофане, доводят до указанной
концентрации без отмывания.

1. Метод определения адгезивности пробиотических штаммов к

эритроцитам.

Эритроциты дважды отмывают от консерванта в ЗФР путем

центрифугирования (1000 об/мин в течение 10 мин) и доводят до нужной
концентрации (10

клеток в 1 мл ЗФР). Подсчет концентрации эритроцитов

производят в камере Горяева с помощью световой микроскопии по
общепринятой методике.

Затем в пробирку с 0,5 мл взвеси микробов указанной выше

концентрации  вносят  0,5  мл  суспензии  эритроцитов  и  инкубируют  30  мин
при  температуре  (37  ±  1)  °С,  периодически  встряхивая.  Потом  смесь
трехкратно отмывают ЗФР от неадгезированных  микробов (при 600 об/мин
по 10 мин).

После отмывки на предметном стекле готовят мазок, фиксируют

смесью  Никифорова,  окрашивают  по  Романовскому–Гимзе  и  при
микроскопировании  проводят  оценку  уровня  адгезии.  Средний  показатель
адгезии  (СПА)  определяют  по  среднему  числу  микробов,  прилипших  к
поверхности одного эритроцита, подсчитывая все имеющиеся эритроциты в 5
полях зрения, но не менее 50 эритроцитов.

Степень адгезивности считают нулевой при СПА от 0 до 0,99; низкой –

от 1,00 до 1,99; средней – от 2,00 до 3,99 и высокой > 4,00.