background image

Для исследования адгезии используют суточные культуры испытуемых 

штаммов. 

Суточную  чистую  культуру  исследуемого  штамма,  выращенную  на 

скошенной  адекватной  питательной  среде,  смывают  ЗФР,  pH  7,2  и  затем 
дважды отмывают ЗФР путем центрифугирования (1500 об/мин в течение 10 
мин).  

Испытуемые  культуры  можно  также  выращивать  на  плотной  среде, 

покрытой целлофаном, при температуре 37 °С в течение 16–18 ч. После этого 
готовят  суспензию,  содержащую  2

10

9

  КОЕ/мл.  Подготовленные  таким 

образом  культуры,  выращенные  на  целлофане,  доводят  до  указанной 
концентрации без отмывания. 

1.  Метод  определения  адгезивности  пробиотических  штаммов  к 

эритроцитам. 

Эритроциты дважды  отмывают от  консерванта  в ЗФР  путем 

центрифугирования  (1000  об/мин  в  течение  10  мин)  и  доводят  до  нужной 
концентрации (10

8

 клеток в 1 мл ЗФР). Подсчет концентрации эритроцитов 

производят  в  камере  Горяева  с  помощью  световой  микроскопии  по 
общепринятой методике. 

Затем  в  пробирку  с  0,5  мл  взвеси  микробов  указанной  выше 

концентрации  вносят  0,5  мл  суспензии  эритроцитов  и  инкубируют  30  мин 
при  температуре  (37  ±  1)  °С,  периодически  встряхивая.  Потом  смесь 
трехкратно отмывают ЗФР от неадгезированных  микробов (при 600 об/мин 
по 10 мин). 

После  отмывки  на  предметном  стекле  готовят  мазок,  фиксируют 

смесью  Никифорова,  окрашивают  по  Романовскому–Гимзе  и  при 
микроскопировании  проводят  оценку  уровня  адгезии.  Средний  показатель 
адгезии  (СПА)  определяют  по  среднему  числу  микробов,  прилипших  к 
поверхности одного эритроцита, подсчитывая все имеющиеся эритроциты в 5 
полях зрения, но не менее 50 эритроцитов. 

Степень адгезивности считают нулевой при СПА от 0 до 0,99; низкой – 

от 1,00 до 1,99; средней – от 2,00 до 3,99 и высокой > 4,00. 

2885