Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

амплификации. Интенсивность сигнала пропорциональна концентрации
продукта ПЦР, что в сочетании с возможностью оценить кинетику процесса
позволяет

проводить

количественное

определение

выбранной

последовательности.

Для постановки ПЦР в реальном времени необходим амплификатор,

обладающий  способностью  возбуждать  и  детектировать  флуоресценцию  на
каждом  цикле  амплификации.  Прибор  состоит  из  трех  блоков:
амплификатора  (термический  блок),  флуоресцентного  детектора  и
компьютера с прилагаемым программным обеспечением.

Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени

используют  интеркалирующие  красители  (например,  SybrGreen  I)  или
специфические  флюоресцентные  зонды  (например,  система  TaqMan).  В
первом  варианте  флюоресцентный  краситель  связывается  с  синтезируемой
двухцепочечной ДНК с возникновением флюоресцентного свечения.

Во втором варианте используются ДНК-зонды, в состав которых

введена  флуоресцентная  метка  и  гаситель  флуоресценции.  На  стадии
элонгации  полимераза  синтезирует  комплементарную  цепь  ДНК  и  по
достижении  участка  зонда  расщепляет  его,  благодаря  наличию  5'-
экзонуклеазной  активности.  В  результате  происходит  разъединение
флуоресцентной  метки  и  гасителя,  что  приводит  к  появлению
детектируемого свечения.

Используемые реагенты, оборудование, условия ПЦР и программу

расчета указывают в фармакопейной статье и нормативной документации
или приводят ссылку на инструкцию по применению набора реагентов для
ПЦР.

Оценка результатов

Полученные результаты учитывают, если одновременные испытания

положительных и отрицательных стандартных или контрольных образцов
дают соответственно положительные и отрицательные ответы.

При необходимости определения нуклеиновой кислоты, для которой