Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

пластинку так, чтобы зубцы гребенок были погружены не менее, чем на 3 мм,
не допуская образования пузырьков воздуха. Агарозный гель застывает в
течение 30 – 60 мин при температуре 18 - 25

С.

Проведение электрофореза

Камеру для электрофореза заполняют буфером раствором с бромистым

этидием, помещают туда пластинку с агарозным гелем и осторожно извлекают
гребенку плавным движением вверх, избегая повреждения образовавшихся
лунок.

Буферный раствор должен полностью покрыть пластинку с гелем слоем

не менее 3-5 мм. Перед внесением в гель подготовленные пробы смешивают с
буферным  раствором  для  внесения  в  таком  соотношении,  чтобы  в  конечной
пробе  была  рабочая  (1х)  концентрация  буферного  раствора.  Полученные
растворы  вносят  в  лунки  агарозного  геля  под  буферный  раствор  для
электрофореза, камеру для электрофореза закрывают, электроды подсоединяют
к источнику тока и включают прибор. Молекулы/фрагменты ДНК одинакового
размера  (и  одинакового  заряда)  движутся  единым  фронтом,  образуя  в  геле
дискретные зоны. Чем меньше размер молекул, тем быстрее они движутся от
катода («-») к аноду («+»). Постепенно исходный образец ДНК, состоящий из
разных  макромолекул/фрагментов,  разделяется  на  зоны,  распределенные  по
длине пластинки. Процесс электрофореза отслеживают по фронту красителя в
геле  (заряженного  низкомолекулярного  вещества,  которое  входит  в  состав
буферного  раствора  для  внесения).  Электрофорез  останавливают  при
приближении  красителя  к  концу  пластинки.  Необходимо  учитывать  размер
фрагмента  ДНК,  концентрацию  агарозного  геля  и  природу  лидирующего
красителя, чтобы избежать выхода образца из геля раньше красителя (табл. 1).

Таблица 1- Размеры фрагментов ДНК, имеющих скорость миграции

некоторых популярных лидирующих красителей в зависимости от
концентрации агарозы.
Концентрация

агарозы

(%)

Эквивалент

для

ксиленцианола

Эквивалент

для

бромфенолового синего

0,5 – 1,5

4-5 тыс. п.о.

400-500 п.о.