background image

2,0 – 3,0 

750 п.о. 

100 п.о. 

4,0 – 5,0 

125 п.о. 

25 п.о. 

 

[п.о.] – пар оснований 

Оценка результатов 

Результаты  электрофореза  ДНК  в  агарозном  геле  регистрируют  в 

присутствии  бромистого  этидия  −  интеркалирующего  соединения, 
образующего  с  фрагментами  ДНК  устойчивое  соединение,  проявляющееся  в 
виде  светящихся  полос  при  облучении  геля  УФ-светом  с  помощью 
трансиллюминатора.  Фрагменты  анализируемой  ДНК  проявляются  в  виде 
светящихся оранжево-красных полос. 

 

Если  образец  представляет  собой  дискретный  набор  макромолекул 

разного  размера,  то  после  проведения  электрофореза  образуются  четкие 
полосы,  расположенные  на  пластинке  одна  под  другой  в  соответствии  с  их 
размером.  Для  определения  относительной  молекулярной  массы  фрагментов 
ДНК одновременно с исследуемым образцом проводят электрофорез маркеров 
макромолекул  ДНК  с  известными  молекулярными  массами.  Набор  маркеров 
должен  охватывать  весь  диапазон  молекулярных  масс  в  данной  системе. 
Образец,  содержащий  маркеры  ДНК,  вносят  в  отдельную  лунку.  Для 
определения  молекулярной  массы  образца  сравнивают  его  положение  в  геле 
относительно  положения  маркеров.  Для  удобства  возможно  построение 
калибровочного графика зависимости логарифма относительных молекулярных 
масс  маркеров  от  Rf  (величины,  равной  отношению  расстояний,  пройденных 
маркером и красителем. 

Разделение линейных молекул 

Для  разделения  линейных  двухцепочечных  молекул  ДНК  используют 

гели  с  различной  концентрацией  агарозы  от  0,3  %  до  2  %,  соответствующие 
определенному размеру молекул ДНК (табл.2). 

Таблица  2.  Соотношение  гелей  с  различной  концентрацией  агарозы  и 

размеров разделяемых фрагментов ДНК.  

3067