Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

2,0 – 3,0

750 п.о.

100 п.о.

4,0 – 5,0

125 п.о.

25 п.о.

[п.о.] – пар оснований

Оценка результатов

Результаты электрофореза ДНК в агарозном геле регистрируют в

присутствии  бромистого  этидия  −  интеркалирующего  соединения,
образующего  с  фрагментами  ДНК  устойчивое  соединение,  проявляющееся  в
виде  светящихся  полос  при  облучении  геля  УФ-светом  с  помощью
трансиллюминатора.  Фрагменты  анализируемой  ДНК  проявляются  в  виде
светящихся оранжево-красных полос.

Если образец представляет собой дискретный набор макромолекул

разного  размера,  то  после  проведения  электрофореза  образуются  четкие
полосы,  расположенные  на  пластинке  одна  под  другой  в  соответствии  с  их
размером.  Для  определения  относительной  молекулярной  массы  фрагментов
ДНК одновременно с исследуемым образцом проводят электрофорез маркеров
макромолекул  ДНК  с  известными  молекулярными  массами.  Набор  маркеров
должен  охватывать  весь  диапазон  молекулярных  масс  в  данной  системе.
Образец,  содержащий  маркеры  ДНК,  вносят  в  отдельную  лунку.  Для
определения  молекулярной  массы  образца  сравнивают  его  положение  в  геле
относительно  положения  маркеров.  Для  удобства  возможно  построение
калибровочного графика зависимости логарифма относительных молекулярных
масс  маркеров  от  Rf  (величины,  равной  отношению  расстояний,  пройденных
маркером и красителем.

Разделение линейных молекул

Для разделения линейных двухцепочечных молекул ДНК используют

гели с различной концентрацией агарозы от 0,3 % до 2 %, соответствующие
определенному размеру молекул ДНК (табл.2).

Таблица 2. Соотношение гелей с различной концентрацией агарозы и

размеров разделяемых фрагментов ДНК.