Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

II,  по  оси  ординат  –  время  свертывания  соответствующих  разведений
стандарта.  Активность  фактора  II  для  каждого  разведения  испытуемого
образца  находят  по  калибровочному  графику.  Активность  FII  (

) в

исследуемом образце рассчитывают по формуле:

⋅

где

−

активность соответствующего разведения исследуемого образца,

найденная по калибровочному графику;

−

разведение исследуемого образца.

Хромогенный метод

Метод основан на сравнении ферментативной активности фактора IIа,

образованного после специфической активации фактора II, в отношении
специфического хромогенного пептидного субстрата с такой же активностью
стандартного образца (международного или аналогичного).

Фактор II активируется с помощью активатора экарина, выделенного из

яда гадюки. Активированный фактор II (тромбин) селективно расщепляет
хромогенный

субстрат

(H-D-фенилаланин-L-пипеколил-L-аргинин-4-

нитроанилида дигидрохлорид, 4-толуолсульфонилглицил-пролил-L-аргинин-
4-нитроанилид,

H-D-циклогексилглицил-α-аминобутирил-L-аргинин-4-

нитроанилид,

D-циклогексилглицил-L-аланил-L-аргинин-4-нитроанилида

диацетат) с образованием

-нитроанилина. Кинетику реакции исследуют

фотометрическим методом при 405 нм. При этом значение оптической
плотности пропорционально активности фактора II.

Определение фактора II хромогенным методом осуществляют с

помощью  специальных  тестовых  наборов.  Анализ  выполняется  в
соответствии  с  инструкцией  к  набору.  Стандартный  образец  и  препарат
предварительно  разводят  плазмой,  дефицитной  по  фактору  II,  до
концентрации  ~  1  МЕ/мл  (основное  разведение).  Из  основного  разведения
готовят  3  разведения  стандартного  образца  и  3  разведения  препарата  трис-
солевым  буферным  раствором  рН  8,4.  Каждое  разведение  стандартного