Для  разведения  стандарта  и  препаратов  используют  NaCl-

имидазоловый буферный раствор pH (7,3±0,1), с добавлением 0,1% раствора 
человеческого  или  бычьего  альбумина.  Для  построения  калибровочного 
графика готовят серию последовательных разведений стандарта, начиная от 
концентрации 2 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации ~ 0,5 – 2 МЕ/мл. 
Анализируют  3  разведения  препарата.  Для  каждого  образца  измерение 
времени  свертывания  проводят  минимум  2  раза.  Измерение  проводят  в 
течение 1 ч после разведения препарата. 

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку 

вносят  100  мкл  плазмы,  дефицитной  по  фактору  VIII,  100  мкл  разведения 
стандарта  или  препарата  и  100  мкл  АЧТВ-реагента  и  инкубируют  при 
температуре  (37±0,5)°С  в  течение  2  мин.  Время  свертывания  фиксируют  с 
момента  прибавления  к  смеси  100  мкл  предварительно  прогретого  до 
температуры (37 ± 0,5)°С 0,025 М раствора кальция хлорида. В зависимости 
от  техники  постановки  анализа  объемы  реагентов  могут  варьироваться  в 
соответствующей пропорции. 

Калибровочный  график  строят  в  полулогарифмических  координатах. 

По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора 
VIII,  по  оси  ординат  –  время  свертывания  соответствующих  разведений 
стандарта.  Активность  фактора  VIII  для  каждого  разведения  испытуемого 
образца  находят  по  калибровочному  графику.  Активность  FVIII  (

А

)  в 

исследуемом образце рассчитывают по формуле: 

,

k

A

A

x

⋅

=

 

где 

x

A

−

 активность соответствующего разведения исследуемого препарата, 

найденная по калибровочному графику; 

k

−

 разведение исследуемого образца. 

2.

 

Хромогенный метод 

Предыдущая <  | 3144  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF