Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

с  фибриллами  коллагена  и  последующем  связывании  поликлональных
антител  к  фактору  Виллебранда,  конъюгированных  с  ферментом,  после
добавления  хромогенного  субстрата  образуется  хромофор,  который  может
быть  количественно  определен  спектрофотометрическим  методом.
Существует линейная зависимость между связыванием коллагена с фактором
Виллебранда и оптической плотностью.

Определение проводят с использованием тест-систем, разрешенных к

применению в практике здравоохранения России в соответствии с
инструкциями по применению.

Для испытаний готовят не менее 3 последовательных серий разведений

стандартного и испытуемого образцов с помощью буфера для разведения до
ожидаемого содержания фактора Виллебранда 1,0 МЕ/мл. Далее проводят
испытания в соответствии с инструкцией производителя используемой тест-
системы.

Активированные факторы свертывания

крови

Определение проводят коагулометрическим методом.
Для испытаний готовят восстановленный раствор препарата. При

наличии в препарате гепарина его нейтрализуют добавлением протамина
сульфата из расчета 10 мкг протамина сульфата на 1 МЕ гепарина. Готовят
разведения препарата 1:10 и 1:100 с помошью трис-буферного раствора рН
7,5.

В 3 пробирки вносят по 0,1 мл стандартной плазмы человека и по

0,1 мл  раствора  фосфолипидов,  помещают  в  водяную  баню  с  температурой
(37±0,5)°C  на  60  с,  после  чего  в  первую  пробирку  добавляют  0,1  мл  трис-
буферного  раствора  (контрольная  проба),  во  вторую

−

0,1 мл испытуемого

препарата в разведении 1:10, в третью пробирку

−

0,1 мл испытуемого

препарата в разведении 1:100. Далее к содержимому каждой пробирки
немедленно добавляют по 0,1 мл нагретого до температуры 37

С раствора

кальция хлорида 3,7 г/л. Отмечают время формирования сгустка от момента
добавления раствора кальция хлорида.