Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Критерием приемлемости результатов является время коагуляции в

контрольной пробе в интервале от 200 до 350 с.

Специфическая удельная активность

Специфическую активность факторов свертывания рассчитывают по

формуле:

Специфическая

активность

Активность фактора свертывания крови, МЕ/мл

Содержание белка, мг/мл

Определение активности антитромбина III

Хромогенный метод

Метод определения активности ATIII основан на его способности

нейтрализовать  тромбин  в  присутствии  гепарина.  К  образцу,  содержащему
ATIII,  добавляют  избыточные  количества  гепарина  и  тромбина.
Образующийся комплекс ATIII-гепарин нейтрализует количество тромбина,
пропорциональное  количеству  ATIII.  Оставшийся  тромбин  селективно
расщепляет  хромогенный  субстрат  с  образованием

-нитроанилина,

абсорбцию которого определяют при 405 нм. Таким образом, количество
ATIII обратно пропорционально величине поглощения свободного

нитроанилина в образце.

Определение активности ATIII проводят с помощью коммерческих

тестовых  систем.  Для  построения  калибровочного  графика  используют
стандартный  образец  ATIII  или  плазму-калибратор,  аттестованную  по
международному  стандарту.  Стандартный  образец  или  плазму-калибратор
растворяют  в  дистиллированной  воде  согласно  указаниям  в  инструкции.
Зависимость величины оптической плотности от активности ATIII линейна в
интервале  активности  ATIII  от  0,1  до  1,0  МЕ/мл.  Используя  буфер  с
гепарином,  готовят  4  разведения  стандартного  образца  или  плазмы-
калибратора с активностью ATIII от 0,1 до 1,0 МЕ/мл. Анализ проводят при
температуре 37°С согласно схеме, приведенной в инструкции к набору. Для
каждого разведения трижды определяют величину оптической плотности при