Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

фаговый препарат.

Методика анализа

Испытания проводят с соблюдением правил асептики. В пробирках,

содержащих по 4,5 мл питательного бульона (МПБ, бульона Хоттингера),
готовят ряд последовательных десятикратных разведений бактериофага от
10

-1

до 10

-6

−

-9

(в зависимости от показателей специфической активности,

заложенных  в  фармакопейную  статью  на  конкретный  фаговый  препарат)  с
обязательной  сменой  пипеток  при  каждом  разведении.  Для  приготовления
первого разведения добавляют 0,5 мл образца препарата к 4,5 мл бульона. В
качестве  контроля  используют  пробирку  с  4,5  мл  бульона  без  фага.  После
этого во все пробирки с полученными разведениями бактериофага пипеткой
вносят по 0,03 мл взвеси суточной агаровой культуры бактерий, содержащей
10

микробных клеток в 1 мл по стандарту мутности (10 МЕ). Результаты

учитывают через (18

1) ч инкубации при температуре (37

1) °С. Возможно

изменение длительности инкубации в зависимости от видовых особенностей
роста  бактериальной  мишени  фагового  препарата,  о  чем  указывают  в
фармакопейной статье. Результат определяют по отсутствию видимого роста
бактерий в присутствии бактериофага. Активность бактериофага обозначают
отрицательной степенью десяти, где степень указывает последнее разведение
бактериофага,  в  котором  рост  контрольного  штамма  визуально  не
наблюдается.  Для  определения  стабильности  лизиса  срок  инкубации
продлевают до 2 сут.

Определение фаговых частиц в 1 мл по методу Грациа (на плотных

питательных средах двухслойным методом)

Мясопептонный 1,5 % агар разливают в чашки Петри по (20

2) мл

(первый слой). Перед использованием чашки с агаром подсушивают в
перевернутом виде с прикрытой крышкой при температуре (37

1) °С в

течение 30

−

60 мин. Для титрации используют посевные штаммы бактерий.

Готовят десятикратные последовательные разведения маточного фага в МПБ