background image

фаговый препарат.  

Методика анализа 

Испытания  проводят  с  соблюдением  правил  асептики.  В  пробирках, 

содержащих  по  4,5  мл  питательного  бульона  (МПБ,  бульона  Хоттингера), 
готовят  ряд  последовательных  десятикратных  разведений  бактериофага  от 
10

-1

 до 10

-6

 10

-9 

 (в зависимости от показателей специфической активности, 

заложенных  в  фармакопейную  статью  на  конкретный  фаговый  препарат)  с 
обязательной  сменой  пипеток  при  каждом  разведении.  Для  приготовления 
первого разведения добавляют 0,5 мл образца препарата к 4,5 мл бульона. В 
качестве  контроля  используют  пробирку  с  4,5  мл  бульона  без  фага.  После 
этого во все пробирки с полученными разведениями бактериофага пипеткой 
вносят по 0,03 мл взвеси суточной агаровой культуры бактерий, содержащей 
10

9

  микробных  клеток  в  1  мл  по  стандарту  мутности  (10  МЕ).  Результаты 

учитывают через (18 

±

 

1) ч инкубации при температуре (37 

±

 

1) °С. Возможно 

изменение длительности инкубации в зависимости от видовых особенностей 
роста  бактериальной  мишени  фагового  препарата,  о  чем  указывают  в 
фармакопейной статье. Результат определяют по отсутствию видимого роста 
бактерий в присутствии бактериофага. Активность бактериофага обозначают 
отрицательной степенью десяти, где степень указывает последнее разведение 
бактериофага,  в  котором  рост  контрольного  штамма  визуально  не 
наблюдается.  Для  определения  стабильности  лизиса  срок  инкубации 
продлевают до 2 сут. 

Определение фаговых частиц в 1 мл по методу Грациа (на плотных 

питательных средах двухслойным методом) 

Мясопептонный  1,5  %  агар  разливают в  чашки  Петри  по  (20 

±

  2)  мл 

(первый  слой).  Перед  использованием  чашки  с  агаром  подсушивают  в 
перевернутом  виде  с  прикрытой  крышкой  при  температуре  (37 

±

  1)  °С  в 

течение 30

60  мин.  Для  титрации используют  посевные штаммы бактерий. 

Готовят десятикратные последовательные разведения маточного фага в МПБ 

2528