Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

действия на культуру клеток в разведениях, необходимых для исследования;
использование реагентов для экстрагирования должно быть обоснованным.

Индикаторный вирус.

Суспензию индикаторного вируса готовят в со-

ответствии с указаниями в нормативной документации на лекарственное
средство, содержащее интерферон. Титр вируса должен быть не менее
10

ТЦД/мл.

Реагенты и питательные среды.

К составу питательных сред, предна-

значенных  для  культур  клеток  животных  и  человека,  предъявляют  опреде-
ленные требования. Для приготовления питательных сред обычно использу-
ются  солевые растворы  Эрла и  Хенкса.  Возможно использование стандарт-
ных  коммерческих  сред  для  ведения  культур  клеток:  Игла  MEM,  МЕМ

DMEM (двойная модификация среды Игла), среды 199 , среды RPMI и др.
Для стимуляции роста, прикрепления и деления клеток обычно добавляют 5
– 10 % инактивированной сыворотки

коров/крупного рогатого скота. В среду

для разведений интерферона добавляют 2 – 5 % сыворотки. Для обеспечения
бактериологической стерильности в питательные среды вводят антибиотики:
пенициллин (натриевая соль), стрептомицин (хлоркальциевый комплекс) из
расчета 100—200 ЕД каждого на 1 мл среды , микостатин (нистатин) из рас-
чета 20—25 ЕД на 1 мл или гентамицин (конечная концентрация 10 мкг/мл).
Содержание L-глютамина в питательной среде должно быть около 292 мг/л.

В качестве поддерживающей среды обычно используют питательную

среду без сыворотки с добавлением антибиотиков и L-глютамина.

Постоянство рН среды является одним из главных условий культиви-

рования. Другим важным условием культивирования является осмотическое
давление. Диапазоны рН и осмоляльности, при которых происходит размно-
жение клеток, узки и варьируют в зависимости от типа клеток.

Оценить количество жизнеспособных клеток возможно при помощи

красителей: метиленового синего, кристаллического фиолетового, тиазоли-
нового синего (МТТ), Аламара голубого и других.