разведения 1/10, 1/50, 1/250 и 1/1250 для определения LD
50
тест-штамма и
проверки жизнеспособности микробов в суспензии (табл. 3).
Таблица 3
– Пример разведения тест-штамма
B. рertussis
18323
Номер
пробирки
Кратность
разведения
Объем перено-
симой суспен-
зии из
предыдущей
пробирки в
последующую,
мл
Объем
внесенного
растворителя,
мл
Полученная
суспензия
содержит в
0,03 мл
(эквивалентно)
Назначение
1
1
А
: 3
1
2
100 млн
2
1
I
: 10
0,5
4,5
10 млн
3
1
2
: 10
0,5
4,5
1 млн
4
1
3
: 10
2
18
100000
Разливают в
3 пробирки
для
заражения –
рабочая
суспензия
5
1
4
: 10
0,5
4,5
10000
Для
определения
LD
50
штамма
6
1
5
: 5
1,0
4,0
2000
7
1
6
: 5
1,0
4,0
400
8
1
7
: 5
1,0
4,0
80
Из пробирки 8 сразу после приготовления разведения делают посев по
0,1 мл на 3 чашки Петри со средой Борде-Жангу или КУА с кровью с целью
подсчета количества содержащихся в ней живых клеток, выраженного в
колониеобразующих единицах (КОЕ). Культуру помещают в термостат с
температурой (36 ± 0,5)
о
С на 3
−
4 сут. Для определения количества КОЕ в 30
мкл проводят подсчёт выросших колоний на 3 чашках и полученное значение
делят на 10. В 0,03 мл разведения из пробирки 8 должно быть не более 50
КОЕ.
При разведении и в процессе заражения суспензию хранят в холодной
водяной бане (вода со льдом). Продолжительность работы с микробной
суспензией не должна превышать 2,5 ч с момента приготовления смыва
культуры.
Предыдущая < | 2766 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF