background image

разведения 1/10, 1/50, 1/250 и 1/1250 для определения LD

50 

 тест-штамма и 

проверки жизнеспособности микробов в суспензии (табл. 3). 

Таблица 3 

– Пример разведения тест-штамма 

B. рertussis 

18323

 

Номер 

пробирки 

Кратность 

разведения 

Объем перено- 

симой суспен-

зии из 

предыдущей 

пробирки в 

последующую, 

мл 

Объем 

внесенного 

растворителя,

мл 

Полученная 

суспензия 

содержит в 

0,03 мл 

(эквивалентно) 

Назначение 

1

А 

: 3 

100 млн 

 

1

I

 : 10 

0,5 

4,5 

10 млн 

 

1

2

 : 10 

0,5 

4,5 

1 млн 

 

1

3

 : 10 

18 

100000 

Разливают в 

3 пробирки 

для 

заражения – 

рабочая 

суспензия 

1

4

 : 10 

0,5 

4,5 

10000 

Для 

определения 

LD

50

 

штамма 

1

5

 : 5 

1,0 

4,0 

2000 

1

6

 : 5 

1,0 

4,0 

400 

1

: 5 

1,0 

4,0 

80 

 

Из пробирки 8 сразу после приготовления разведения делают посев по 

0,1 мл на 3 чашки Петри со средой Борде-Жангу или КУА с кровью с целью 
подсчета  количества  содержащихся  в  ней  живых  клеток,  выраженного  в 
колониеобразующих  единицах  (КОЕ).  Культуру  помещают  в  термостат  с 
температурой (36 ± 0,5) 

о

С на 3

4 сут. Для определения количества КОЕ в 30 

мкл проводят подсчёт выросших колоний на 3 чашках и полученное значение 
делят на 10. В 0,03 мл разведения из пробирки 8 должно быть не более 50 
КОЕ. 

При разведении и в процессе заражения суспензию хранят в холодной 

водяной  бане  (вода  со  льдом).  Продолжительность  работы  с  микробной 
суспензией  не  должна  превышать  2,5  ч  с  момента  приготовления  смыва 
культуры. 

2766