background image

прежде,  после  их  превращения,  соответственно,  в  диаминопропионовую  и 
диаминомасляную  кислоты  под  действием  бис-(1,1-трифторацетокси)-
йодбензола, как указано в методе 11, описанном в разделе «Гидролиз белка». 

В  качестве  внутреннего  стандарта  для  этого  метода  не  может  быть 

использован  норлейцин,  так  как  его  производное  элюируется  в  области 
хроматограммы со скоплением пиков производных первичных аминокислот. 
В  качестве  внутреннего  стандарта  используют  нитротирозин,  который 
элюируется в свободной от пиков области хроматограммы. 

Предел  обнаружения  ДАБС-аминокислот  обычно  составляет  1 пмоль. 

Предел  количественного  определения  ДАБС-аминокислот  составляет  2  – 
5 пмоль.  Для  проведения  одного  анализа  требуется  всего  лишь  10  –  30 нг 
дериватизированного ДАБС-Cl белкового гидролизата. 

 
МЕТОД 7. 

Предколоночная 

дериватизация 

с 

9-

фторенилметилхлорформиатом 

ФМОК-Cl  взаимодействует  с  первичными  и  вторичными 

аминокислотами  с  образованием  производных  с  сильной  флуоресценцией. 
Реакция  протекает  в  мягких  условиях  в  водном  растворе  в  течение  30 с. 
Получаемые  производные  аминокислот  стабильны,  за  исключением 
производных  гистидина,  подвергающихся  постепенной  деградации. 
Несмотря  на  то,  что  ФМОК-Cl  сам  по  себе  обладает  флуоресценцией, 
избыток  реагента  и  флуоресцирующие  побочные  продукты  реакции  могут 
быть  удалены  из  реакционной  смеси  без  потерь  ФМОК-производных 
аминокислот. 

ФМОК-аминокислоты могут быть разделены на колонке, заполненной 

октадецилсиликагелем,  методом  обращенно-фазовой  ВЭЖХ.  Разделение 
проводят по программе градиентного элюирования с линейным изменением 
состава  подвижной  фазы  от  смеси  «ацетонитрил  :  метанол  :  ацетатный 
буферный  раствор»  (10:40:50  (об./об./об.))  до  смеси  «ацетонитрил  : 
ацетатный  буферный  раствор»  (50:50  (об./об.)),  что  позволяет  разделить  20 

Предыдущая <  | 699  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF