Предколоночная дериватизация

производных аминокислот в течение 20 мин. Элюируемые из колонки
производные аминокислот детектируют при длине волны возбуждения
260 нм и длине волны эмиссии 313 нм.

Пределы обнаружения производных аминокислот находятся в нижнем

фемтомолярном диапазоне. Линейность сигнала для большинства
аминокислот наблюдается в области 0,1 – 50 мкмоль/л.

МЕТОД 8. Предколоночная дериватизация с 7-фтор-4-нитробензо-2-
окса-1,3-диазолом (НБФ)

7-фтор-4-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом

(7-фтор-4-

нитробензофуразан,  НБФ)  взаимодействует  с  первичными  и  вторичными
аминокислотами  с  образованием  производных  с  сильной  флуоресценцией.
Аминокислоты  дериватизируются  НБФ  в  течение  5 мин  при  температуре
60 °С.

НБФ-производные аминокислот могут быть разделены на колонке,

заполненной  октадецилсиликагелем,  методом  обращенно-фазовой  ВЭЖХ  с
использованием  программы  градиентного  элюирования  и  подвижной  фазы,
состоящей из ацетонитрила и водного буферного раствора. В результате 17
производных  аминокислот  разделяются  в  течение  35 мин.  В  качестве
внутреннего  стандарта  может  быть  использована  ε-аминокапроновая
кислота, которая элюируется в свободной от пиков области хроматограммы.
Элюируемые из колонки производные аминокислот детектируют при длине
волны возбуждения 480 нм и длине волны эмиссии 530 нм.

Чувствительность этого метода почти такая же, как в предколоночной

дериватизации с ОФА (метод 5), за исключением пролина, который не
реагирует с ОФА (преимущественное отличие метода с НБФ). Предел
обнаружения для каждой аминокислоты составляет около 10 фмоль. Анализ
проводят с использованием 1,5 мг белкового гидролизата в предколоночной
реакционной смеси.