Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

Постановка РНГА (микрометод).

Постановку РНГА проводят на 3 по-

листироловых планшетах с круглодонными лунками. В 8 лунок

рядов каж-

дого

планшета

вносят по 0,025 мл 0,9

% раствора натрия хлорида. В первые

лунки каждого ряда вносят по 0,025 мл следующих образцов: в 1

−

2 ряды

−

цельной пробы, в 3

−

ряды

−

разведение 1:3, в 5

−

ряды

−

разведение 1:7

;

и делают последовательные двукратные разведения до восьмой

лунки (из

восьмой

лунки 0,025 мл удаляют в емкость с дезинфицирующим раствором),

получая разведения: в 1

−

2 рядах

–

от 1:2 до 1:256, в 3

−

4 рядах

−

от 1:6 до

1:768, в 5

−

6 рядах

−

от 1:14 до 1:1792. После этого в лунки всех рядов до-

бавляют по 0,025 мл 50 % взвеси формалинизированных эритроцитов барана,
разведенных в 50 раз. Содержимое лунок перемешивают покачиванием
планшетов, оставляют на 15

мин при температуре (20

2) °С и затем во все

лунки вносят по 0,05 мл сыворотки холерной О1 агглютинирующей адсорби-
рованной в

разведении 1:2. Планшеты

оставляют при температуре (20

2) °С

в течение 24

ч.

Постановка контроля формалинизированных эритроцитов барана. В

контрольную лунку вносят 0,025 мл взвеси

разведенных в 50 раз эритроцитов

барана и добавляют 0,075 мл 0,9

% раствора натрия хлорида.

Учет результатов РНГА

Результат считают положительным при нали-

чии гемагглютинации (эритроциты выпадают на дно лунки равномерным
слоем в виде «зонтика», занимая не

менее 2/3 сферической поверхности лун-

ки; в ряде случаев может наблюдаться фестончатое оплывание краев агглю-
тината).

Результат считают отрицательным при отсутствии гемагглютинации

(эритроциты выпадают на дно лунки в виде темно

–

коричневой полусферы

или узкого колечка с ровным краем

–

«пуговки»). В контрольных лунках ре-

зультат должен быть отрицательным.

Последние лунки

ряда, в которых наблюдается положительная ге-

магглютинация

учитывают как показатели титров в РНГА, определяющие