Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

Метод постановки РТГА с вирусом гриппа (макрометод).

РТГА при-

меняют для установления типа и подтипа вируса, т.е. специфичности, а также
для определения нарастания титров специфических антител. Постановка
РТГА включает следующие этапы работы: приготовление взвеси эритроци-
тов, определение гемагглютинирующего титра антигена в реакции гемагглю-
тинации (РГА) и рабочей дозы вируса, постановка самой реакции. Для поста-
новки реакции необходимы следующие ингредиенты:

–

антиген (вакцина, вируссодержащая жидкость

–

аллантоисная

или культуральная);

–

иммунные сыворотки к различным серотипам вируса гриппа

;

–

фосфатный буферный раствор рН 7,2

0,2;

–

взвесь куриных эритроцитов, 1 %.

Приготовление взвеси куриных эритроцитов

. Для

постановки РТГА

используют эритроциты петухов. Кровь у петухов берут из сердца или под-
крыльцовой вены

Свежеполученную кровь от 3

–

5 петухов помещают во флакон со стек-

лянными бусами или же с одним из антикоагулянтов (раствор Альсевера, 5%
раствор натрия цитрата). Дефибринирование крови проводят немедленно пу-
тем интенсивного встряхивания флакона

в течение 5

–

7 мин при температуре

(20

С до выпадения волокон фибрина.

Дефибринированную кровь фильтруют через 4 слоя марли, затем трех-

кратно отмывают фосфатным буферным раствором (на 1 объем крови

– 4

объема фосфатного буферного раствора) при центрифугировани (800

200)

об/мин в течение (15

5) мин. Надосадочную жидкость удаляют. Из осадка,

принимаемого за 100 %, готовят 1 % суспензию куриных эритроцитов по
объему.

Определение гемагглютинирующего титра антигена

. В круглодон-

ных лунках плексигласового планшета готовят двукратные разведения анти-
гена (титруемого вируса из испытуемой вакцины) в объеме 0,4 мл на фос-