Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

иммунных сывороток с помощью нейраминидазы холерных вибрионов

или

RDE-

реагентом. При наличии инструкции по применению коммерческого

реактива необходимо следовать требованиям, изложенным в данном доку-

менте.

Метод основан на способности нейраминидазы холерных вибрионов,

не действуя на специфические антитела, разрушать ингибиторы гемагглюти-

нации к вирусам гриппа А и В в сыворотках крови человека, кур, крыс, кро-

лика.

К 1 объему сыворотки добавляют

3 объема реагента нейраминидазы. К

смеси, состоящей из 0,1 мл сыворотки и 0,3 мл реагента нейраминидазы

до-

бавляют 0,6 мл фосфатного буферного раствора для получения разведения

сыворотки 1:10. Далее смесь инкубируют при температуре (37

С в тече-

ние 18

–

20 час и затем прогревают при температуре

(56

С в течение 30

мин. Сыворотка, обработанная нейраминидазой, может быть использована

для постановки

РТГА в течение 2 недель при условии ее хранения при тем-

пературе (5

С.

Приготовление 0,1 М раствора фосфатного буферного рН 7,2

0,2.

Раствор 1.

В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 17,8 г

натрия фосфата двузамещенного 2

–

водного

(Na

HPO

∙2

O),

растворяют

500 мл воды очищенной, доводят объём раствора тем же растворителем до

метки и перемешивают.

Раствор 2.

В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 15,6 г

натрия фосфата однозамещённого 2

–

водного

(NaH

∙2

O),

растворяют в

0 мл

воды очищенной, доводят объём раствора тем же растворителем до

метки и перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 720 мл раствора 1, при-

бавляют 280 мл раствора 2 и перемешивают. Затем в мерную колбу вмести-

мостью 1000 мл помещают 100 мл приготовленного

0,1 М фосфатного бу-

ферного раствора доводят объём раствора водой очищенной до метки, пере-

мешивают, прибавляют 8,5 г натрия хлорида и вновь перемешивают. рН по-

лученного раствора должен быть 7,2

0,05. Если

показатель рН выше или

ниже требуемого, его соответственно доводят 1 М раствором хлористоводо-

родной кислоты или 1 М раствором натрия гидроксида.

Приготовление раствора Альсевера

Состав:

–

2,05 % глюкозы;

–

0,42 % натрия хлорида;

–

0,8 % натрия цитрата;

–

100,0 мл воды очищенной

рН раствора доводят с помощью 5 % раствора лимонной кислоты до рН

5,6 (примерно 10 мл 5 % раствора лимонной кислоты на 1 л раствора Альсе-

вера). Раствор стерилизуют фильтрацией или автоклавированием в течение 3

последовательных дней при температуре 100 °С и давлении 0,7

атм. Для кон-

сервирования раствора добавляют

на 1 мл крови 1,2 мл раствора Альсевера.