Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

В данном растворе

эритроциты можно хранить при температуре (4

С в

течение 1

–

2 нед. Перед употреблением эритроциты необходимо трехкратно

отмыть фосфатным буферным раствором с помощью центрифугирования при

(800 ± 200)

об/мин в течение 10 мин.

3.Приготовление консервирующего 5 % раствора натрия цитрата.

раствор натрия цитрата перед использованием разводят в 2 раза 0,1 М фос-

фатным буферным раствором. К одной части полученного раствора натрия

цитрата добавляют 2 части крови петухов. В данном растворе эритроциты

могут храниться при температуре (4

С в течение 3

–

5 сут

Метод постановки РТГА с вирусом гриппа (микрометод).

Принцип

метода, его учет и ингредиенты для реакции, проводимой микрометодом, те
же, что и для проведения РТГА макрометодом. Отличие методов заключает-
ся в изменении концентрации и объемов ингредиентов.

Реакцию ставят на микропанели с «U»

образными лунками.

1. Приготовление 0,5 % взвеси куриных эритроцитов. Взвесь готовят из

1 % суспензии эритроцитов (макрометод) разведением ее в 2 раза фосфатным
буферным раствором (в соотношении 1:1).

2. Определение гемагглютинирующего титра антигена. В каждую лун-

ку микропанели одного ряда вносят фосфатный буферный раствор в объеме
50 мкл. Затем в первую лунку вносят 50 мкл антигена в разведении 1:10 и да-
лее проводят титрование по принципу двукратного разведения. Из последней
лунки удаляют 50 мкл. Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл 0,5 % суспен-
зии эритроцитов. Содержимое лунок перемешивают встряхиванием и остав-
ляют при комнатной температуре на 40

–

45 мин до оседания эритроцитов в

контроле.

Реакцию оценивают по «четырехкрестовой» системе. За титр антигена,

или одну агглютинирующую единицу (АЕ), принимают наибольшее разведе-
ние антигена, дающее четко выраженную агглютинацию эритроцитов

(+++

или ++++).

Определение титра антигена сопровождается постановкой отрицатель-

ного контроля на отсутствие спонтанной агглютинации эритроцитов. В каче-
стве отрицательного контроля служат несколько лунок панели, в которые
вместо антигена внесен фосфатный буферный раствор.