Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

3. Приготовление рабочей дозы антигена. Рабочая доза антигена при

постановке РТГА микрометодом равна 8 АЕ. Для её приготовления ге-
магглютинирующий титр делят на 16. Полученное значение указывает во
сколько раз необходимо развести антиген.

Пример разведения антигена: титр антигена равен 160. Разделив 160 на

16, получается цифра

10, указывающая на то, что антиген необходимо разве-

сти в 10 раз.

Перед постановкой основного опыта проверяют точность приготовле-

ния рабочей дозы (8 АЕ). Для этого в шесть лунок микропанели, начиная со
второй, вносят по 25 мкл фосфатного буферного раствора. В 1 и 2 лунки до-
бавляют по 25 мкл приготовленной рабочей дозы антигена. После перемеши-
вания 25 мкл смеси переносят из 2 лунки в 3, из 3

–

в 4 и т.д. Из последней

лунки панели 25 мкл удаляют. Затем во все лунки добавляют по 25 мкл фос-
фатного буферного раствора и по 50 мкл 0,5 % суспензии эритроцитов. После
встряхивания

смесь

оставляют

при

температуре

(20

С на 40

–

45 мин до оседания эритроцитов в контроле.

При правильном выборе рабочей дозы агглютинация эритроцитов

должна наблюдаться только в четырех лунках панели. В остальных лунках
агглютинация должна отсутствовать. В случае отклонения от указанного ре-
зультата добавляют антиген или фосфатный буферный раствор для получе-
ния необходимой рабочей дозы.

4. Постановка реакции торможения гемагглютинации. Метод поста-

новки реакции микрометодом соответствует таковому, описанному для мак-
рометода, за исключением объемов используемых ингредиентов реакции.

Готовят двукратные разведения сыворотки в объеме 25 мкл, вносят ра-

бочую дозу антигена (8 АЕ) в объеме 25 мкл

и после контакта антигена и

сыворотки (от 30 мин до 1 ч) при температуре (20

С в каждую лунку

панели вносят по 50 мкл 0,5 % взвеси эритроцитов. После оседания эритро-
цитов в контроле (как правило, через 40

–

45 мин) проводят учет результатов

(макрометод).