Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

рН

раствора доводят с помощью 5 %

раствора лимонной кислоты до рН

5,6 (примерно 10 мл 5 % раствора

лимонной кислоты на 1 л раствора

Альсевера). Раствор стерилизуют фильтрацией или автоклавированием в

течение 3 последовательных дней при температуре 100 °С и давлении

0,7

атм. Для

консервирования добавляют на 1 мл крови 1,2 мл раствора

Альсевера.

В данном растворе эритроциты могут храниться при температуре

С в течение 1

–

2 нед. Перед

использованием эритроциты необходимо

трехкратно отмыть фосфатным буферным раствором с помощью

центрифугирования при (800

± 200)

об/мин в течение 10 мин.

Приготовление консервирующего 5 % раствора натрия цитрата.

% раствор натрия цитрата перед использованием разводят в 2 раза 0,1

М фосфатным буферным раствором

(рН 7,2

0,2).

К одной части

полученного раствора натрия цитрата добавляют 2 части крови петухов. В

данном растворе эритроциты могут храниться при температуре (4

С в

течение 3

–

5 сут.

Метод постановки РТГА с вирусом гриппа (микрометод).

Принцип

метода, его учет и ингредиенты, те же, что и для проведения РТГА
макрометодом. Отличие методов заключается в изменении концентрации и
объемов ингредиентов.

Реакцию ставят в

микропланшетах

с «U»

образными лунками.

1. Приготовление 0,5 % взвеси куриных эритроцитов

Взвесь готовят из

1 % суспензии эритроцитов (см. макрометод) разведением ее в 2 раза
фосфатным буферным раствором.

2. Определение гемагглютинирующего титра антигена

В каждую

лунку микропланшета

одного ряда вносят фосфатный буферный раствор в

объеме 50 мкл. Затем в

первую лунку вносят 50 мкл антигена в разведении

1:10 и далее проводят титрование по принципу двукратного разведения. Из
последней лунки удаляют 50 мкл. Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл 0,5
% суспензии эритроцитов. Содержимое лунок перемешивают встряхиванием
и оставляют при комнатной температуре на 40

–

45 мин до оседания

эритроцитов в контроле.

Реакцию оценивают по «четырехкрестовой» системе. За титр антигена,

или одну агглютинирующую единицу (АЕ), принимают наибольшее