Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

разведение антигена, дающее четко

выраженную агглютинацию эритроцитов

(+++ или ++++).

Определение

титра

антигена

сопровождается

постановкой

отрицательного контроля на отсутствие спонтанной агглютинации
эритроцитов. В качестве отрицательного контроля служат несколько лунок
панели, в которые вместо антигена внесен фосфатный буферный раствор.

3. Приготовление рабочей дозы антигена

Рабочая доза антигена при

постановке РТГА микрометодом равна 8 АЕ. Для её расчета и последующего
приготовления гемагглютинирующий титр делят на 16. Полученное значение
указывает во сколько раз необходимо развести антиген.

Пример: титр антигена равен 160. Разделив 160 на 16, получаем цифру

10, указывающую на то, что антиген необходимо развести в 10 раз.

Перед постановкой основного опыта проверяют точность

приготовления рабочей дозы (8 АЕ). Для этого в шесть лунок
микропланшета, начиная со второй, вносят по 25 мкл фосфатного буферного
раствора. В 1 и 2 лунки добавляют по 25 мкл приготовленной рабочей дозы
антигена. После перемешивания 25 мкл смеси переносят из 2 лунки в 3, из 3

–

в 4 и т.д. Из последней лунки панели 25 мкл удаляют. Затем во все лунки

добавляют по 25 мкл фосфатного буферного раствора и по 50 мкл 0,5 %
суспензии эритроцитов. После встряхивания смесь оставляют при
температуре (20

С на 40

–

45 мин до оседания эритроцитов в контроле.

При правильном выборе рабочей дозы агглютинация эритроцитов

должна наблюдаться только в четырех лунках микропланшета. В остальных
лунках агглютинация должна отсутствовать. В случае отклонения от
указанного результата добавляют антиген или фосфатный буферный раствор
для получения необходимой рабочей дозы.

4. Постановка реакции торможения гемагглютинации

Метод

постановки реакции микрометодом соответствует таковому, описанному для
макрометода, за исключением объемов используемых ингредиентов реакции.