использовать то же разведение неиммунной кроличьей сыворотки, что и им-
мунной.
Смеси
вирус
-
сыворотка выдерживают при температуре
37 +1 °
С в те-
чение 1 ч.
Постановка реакции нейтрализации.
Используют одну из указанных
выше культур клеток.
Перед внесением на монослой
культуры клеток смеси ви-
рус
−
сыворотка, ростовую среду сливают и монослой промывают один раз
раствором Эрла. Смесь вирус
-
сыворотка вносят в объёме 0,2 мл в каждые 3
флакона с ФЭК или в каждые 3 лунки планшетов с клетками
PS
или
Vero
.
Флаконы с ФЭК или планшеты с
PS
или
Vero
помещают в термостат
при температуре
36+1
°С на 2 ч., периодически обкатывают монослой
кле-
ток смесью вирус
–
сыворотка путем покачивания флаконов или планшетов
через каждые 15
–
20 мин.
После адсорбции вируса, на клеточный монослой наносят питательный
агар, пригодный для данной культуры клеток
.
Учёт результатов.
Учёт результатов
проводят на 5 сут при титровании
в культуре клеток ФЭК
или
PS
, или на 6
–
7 сут при титровании вируса в куль-
туре клеток
Vero
. Подсчитывают количество бляшек отдельно в каждой лун-
ке или флаконе. Затем вычисляют среднее количество бляшек
из 3 лунок
планшета или 3
флаконов, соответственно для каждого разведения вируса.
Титр вируса с иммунной и не иммунной сыворотками подсчитывают, как
описано в разделе «Специфическая активность» и выражают в десятичных
логарифмах
БОЕ
(бляшкообразующих единиц)
.
Индекс нейтрализации (подлинность вируса желтой лихорадки) пред-
ставляет собой разницу
lg
титров вируса с не иммунной сывороткой и им-
мунной
сывороткой и должен быть не менее 1,0
lg.
Предыдущая < | 5430 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF