Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

Определение ЦПД на культуре клеток

VERO

в двух пассажах. В 4 мат-

раса емкостью 250 мл вносят по 25 мл культуры клеток

VERO В

(посевная кон-

центрация 100

000 клеток в 1 мл ростовой среды Игла с добавлением 8 % эм-

бриональной телячьей сыворотки), инкубируют до образования монослоя при
температуре 37 ºС в течение 24

48 ч. Затем сливают ростовую среду и дважды

промывают раствором Хэнкса (40

50 мл на промывку одного матраса). Раствор

сливают.

Проведение первого пассажа. В два матраса вносят испытуемый образец

по 10 % от объема среды, в оставшиеся два матраса

ростовую среду Игла с

добавлением 8 % эмбриональной телячьей сыворотки. Матрасы инкубируют
при температуре 37 ºС в течение 5 сут, с ежедневным микроскопированием с
целью выявления возможного ЦПД. Затем матрасы с содержимым подвергают
однократному замораживанию при температуре

20 ºС оттаиванию при комнат-

ной температуре, затем выдерживают при температуре 6

8 ºС в течение 20

- 24

ч. Образовавшиеся надосадочные жидкости из матрасов сливают и объединяют
в трех отдельных емкостях, по одной на каждый штамм ВПГ

1, ВПГ

2 и кон-

троль.

Проведение второго пассажа. Из каждой емкости с объединенным мате-

риалом первого пассажа отбирают пробу по 10 % от объема ростовой среды и
проводят второй пассаж при тех же условиях.

Учет результатов проводят путем микроскопии монослоя клеток (окуляр

×10, объектив ×20). В контрольных пробах клетки

VERO

должны образовы-

вать монослой, иметь прозрачную цитоплазму, дифференцированные ядра и
четко выраженные признаки контактной ингибиции. Клеточный монослой в
матрасах с испытуемыми пробами 1 и 2 пассажей не должен отличаться от мо-
нослоя в контроле.

Определение ЦПД проводят на белых мышах массой 8

10 г.

Первый пассаж. После замораживания, оттаивания и осаждения монослоя

клеток, отделяют надосадочную культуральную жидкость и по 0,03 мл вводят
интрацеребрально 10

ти животным опытной группы.