Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

одной из боковых сторон культурального флакона и выращивают при темпе-
ратуре (37±1)

°С. Клеточный монослой формируется на 3

−

4 сут.

Титрование проводят в 96

луночных панелях для культивирования кле-

ток

Содержание каждого типа вируса определяют в реакции нейтрализации

путем нейтрализации другого

типа

вируса соответствующей

гомотипичной

диагностической

энтеровирусной

моновалентной

сывороткой.

Рабочее разведение гомотипичной сыворотки к каждому из двух

типов

полиовирусной вакцины должно снижать титр вируса не менее

чем на

2 lg

(не менее

чем в 100 раз). В каждое

испытание

наряду с исследуемым

образ-

цом включают одновременное титрование СО вакцины. Разведения вакцины
и СО готовят на питательной среде Игла МЕМ, содержащей 2

сыворотки

крови плодов коров

кратностью

5. Диапазон разведений должен включать

по меньшей мере три

разведения препаратов, при которых вирус разрушает

от 10

% до 90

% зараженных клеток. В каждую лунку панели вносят

0,05

мл

выбранных разведений вакцины

(тип

или

тип

или СО и 0,05

мл рабочего

разведения

нейтрализующей

сыворотки

к другому

типу

вируса (по 8

−

12 лу-

нок на разведение) и инкубируют 3

при

температуре

(37±1)

°С. Затем во все

лунки панелей при титровании двухвалентной вакцины добавляют по 0,1

мл

взвеси клеток в концентрации 100

000

−

200

000 клеток в мл. В контрольные

лунки вносят по 0,1

мл клеточной суспензии и 0,1

мл питательной среды. Па-

нели инкубируют в термостате при температуре (37

±1) °

С в газовой среде,

содержащей 5

% СО

в течение 7

сут.

Клетки

Нер-2

в лунках панели про-

сматривают в инвертированном микроскопе на наличие цитопатогенного
действия вирусов на 3

5 и 7 дни инкубирования. ТЦД

/мл вируса высчиты-

вают на 7 сут

по методу Рида и Менча

Так как разведения вируса, взятые в опыт по определению титра в

двухвалентной вакцине, разводятся в два раза

нейтрализующей

сывороткой

значение титра 10

дозовой

вакцины (0,2 мл/доза) должен быть увеличен на

0,6 lg.

Титрование каждой серии полиомиелитной вакцины проводят не ме-