Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

Специфическая активность.

Одна

доза вакцины должна содержать

(25

7,5) мкг Ви

антигена. Определение проводят методом ракетного имму-

ноэлектрофореза

(РИЭФ)

В химическую пробирку с 16 мл расплавленного и охлажденного до

температуры 56

C 1

% геля агарозы вносят 0,5 мл сыворотки против Ви

антигена

S.typhi

(титр не ниже 1:800) и перемешивают. Содержимое пробир-

ки выливают на стеклянную пластинку размером 6

× 12

см, установленную

на горизонтальной поверхности. Пластинка должна покрыться гелем агарозы
равномерно и полностью. Толщина геля должна составлять

(1,0 ±

0,1) мм.

После застывания геля агарозы пластинку накладывают на трафарет и проби-
вают лунки пробойником диаметром 4 мм, после чего удаляют гель из лунок
с помощью вакуумного насоса или иглы.

В катодную и анодную части

электрофоретической камеры заливают

по 800 мл

разведенного

трис

боратного буферного раствора (раствор 2) и

охлаждают заполненную буферным раствором камеру до температуре 4 °С

холодильной установке. Охлажденную камеру вынимают и

помещают в нее

пластину

таким образом, чтобы край пластины с лунками находился у анод-

ной части.

Электродные мостики для соединения гелевой пластины

с буферным

раствором

готовят из 4 слоев фильтровальной бумаги размером 6

12 см.

их помощью соединяют поверхность агарозы с трис

боратным буферным

раствором. Расстояние от края мостика до лунок должно быть не менее 15
мм. В лунки последовательно

вносят по 15 мкл раствора

СО

Ви

антигена с

концентрацией 5; 10; 15; 20 мкг/мл для построения калибровочного графика
и испытуемый образец

вакцины, предварительно разведенный в 5 раз.

Про-

водят электрофорез при напряжении 180

–200

при постоянной силе тока 10

мА в течение 4 ч. Каждую

пробу вносят в 2 лунки. Время от начала нанесе-

ния образцов до включения прибора не должно превышать 10 мин. По окон-
чании электрофореза пластинку переносят в

кювету с 0,9

% раствором

натрия хлорида и выдерживают 15

– 20

при температуре 18

– 20

°С

для от-