рез колонку длиной около 0,4 м с внутренним диаметром 9 мм, уравнове-
шенную 0,2 М раствором натрия хлорида
,
пропускают около 0,9 мг ПС
в
объеме 0,5 мл раствора 0,2 М натрия хлорида и элюируют со скоростью око-
ло 14 мл/ч. Фракции регистрируют при помощи ультрафиолетового детекто-
ра при длине волны 206 нм. Выход ПС
оценивают по площади пиков до и по-
сле К
d = 0,5.
Калибрование колонки.
Определяют полный (
V
t
) и свободный (
V
o
) объ-
емы колонки с помощью калибровочных растворов
–
голубого декстрана и
натрия азида в условиях, описанных выше.
Вычисление объема колонки
V
е
, соответствующего К
d
= 0,5, проводят
по формуле:
V
е
=
V
о
+ 0,5 (
V
t
–
V
о
),
где
:
V
о
–
свободный
объем
колонки
(
объем
элюции
голубого декстра-
на)
,
мл;
V
t
–
общий объем колонки с гелем (объем элюции натрия азида), мл;
0,5 –
значение коэффициента распределения вещества (К
d
) на колонке.
Пересчитывают значение
V
е
в мм находят на хроматограмме и рассчи-
тывают по формуле
:
.
)
(
)
(
)
(
)
(
мл
V
мм
V
мл
V
мм
V
t
t
e
e
⋅
=
Пики, элюирующиеся до и после
Kd
= 0,5 (значение
V
е
на
хромато-
грамме, мм), интегрируют вручную.
Содержание ПС
(
А
) в субстанции вакцины, элюировавшегося до
Kd =
0,5, выраженное в процентах, определяют по формуле:
%,
100
)
(
2
1
1
⋅
+
=
S
S
S
A
где
:
S
1
–
площадь пика, элюировавшегося до К
d = 0,5;
S
2
–
суммарная площадь пиков, элюировавшихся до и после К
d = 0,5.
Примечания
1.
Приготовление испытуемого раствора
.
Растворяют
(0,9 ± 0,050)
мг субстанции в 0,5 мл 0,2 М раствора натрия хлорида. Полученный раствор
Предыдущая < | 5278 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF