Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

ки) и инкубируют в термостате в

течение 30

–

40 мин при температуре

(37

затем выдерживают в холодильнике

при температуре (6

С в тече-

ние 24

– 4

8 ч. Полученную иммунную сыворотку отбирают в стерильные

пробирки и

исследуют в РМА

для выявления специфических антител к

штаммам лептоспир

серогрупп, входящих в состав вакцины.

Методика

реакции микроагглютинации (РМА

)

РМА ставят в лунках полистиролового планшета. В лунки с А1 по А4

вносят по 0,2 мл анализируемой сыворотки, разведенной 1:25

0,9 % раство-

ром натрия хлорида. В лунки с В1

–

В4 по

F1 – F

4 вносят по 0,1 мл 0,9 % рас-

твора натрия хлорида. Разведение

сыворотки осуществляют автоматической

пипеткой в направлении лунок от

(в вертикальном ряду), перенося по

0,1 мл каждого разведения

в следующую в ряду лунку, получая таким

обра-

зом разведения сыворотки

с 1:25 до 1:800.

В качестве антигенов используют 7

– 12-

суточные культуры лептоспир

серогрупп

(

L. interrogans Icterohaemorrhagiae copenhageni, L. interrogans

Grippotyphosa grippotyphosa, L. interrogans Pomona mozdoc, L. interrogans

Sejroe sejroe

)

, выращенные на среде Терских.

При нанесении 0,02 мл культу-

ры каждой серогруппы на предметное стекло количество лептоспир должно
быть не менее

100 –

150 клеток в поле зрения микроскопа при увеличении

200×.

После разведения

сыворотки в каждый ряд лунок от А1 до

1, от А2 до

2, от А3 до

3 и от А4 до

4 вносят по 0,1 мл культуры лептоспир соответ-

ствующей серогруппы. После добавления антигенов получают разведение
сывороток от 1:50 до 1:

1600

в каждом вертикальном ряду. Одновременно

проводят контроль культур: в

лунки (Н1, Н2, Н3, Н4) вносят

по 0,1 мл 0,9 %

раствора натрия хлорида

по 0,1 мл живой культуры лептоспир каждой се-

рогруппы в отдельности. Планшет выдерживают в течение 1 ч

при темпера-

туре (37

1) °С. Из лунок планшета с определенной серогруппой отбирают

по 0,02

мл смеси сыворотки и культуры лептоспир, наносят на предметное